Bakterijų krakmolo hidrolizės tyrimas, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą hidrolizuoti krakmolą

Bakterijų krakmolo hidrolizės tyrimas, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą hidrolizuoti krakmolą!

Principas:

Kai kurios bakterijos geba hidrolizuoti krakmolą, nes jos gali pagaminti sacharolitinį fermentą.

Nors krakmolas su jodu sudaro tamsiai mėlynos spalvos, jo hidrolizuoti galutiniai produktai neturi tokios tamsiai mėlynos spalvos su jodu.

Atliekant krakmolo hidrolizės bandymą, bandomosios bakterijos auginamos ant agaro plokštelių, kuriose yra krakmolo. Kai bakterijų kolonijos yra matomos, plokštės užtvindomos jodo tirpalu. Jei bakterijos turi galimybę hidrolizuoti krakmolą, jos kolonijos hidrolizuoja krakmolą terpėje juos supančiose vietose, o likusios plokštelių dalys turi ne hidrolizuotą krakmolą.

Dėl to, užtvindžius jodo tirpalu, aplink kolonijas susidaro skaidrios skaidrios zonos, nes aplink juos susidarę hidrolizuoti produktai su jodu nesudaro tamsiai mėlynos spalvos. Kita vertus, likusios plokščių sritys tampa tamsiai mėlynos, nes jodas sudaro tamsiai mėlynos spalvos, o šiuose plotuose yra nehidrolizuotas krakmolas.

Reikalingos medžiagos:

Petri lėkštelės, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, krakmolo agaras, Lugol jodo tirpalas, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Išvalomi du Petri lėkštelės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta (7.21 pav.). Šis etapas ir Petri lėkštelių sterilizavimas 6 etape yra praleidžiami, jei sterilizuojami orkaitėje sterilizuoti Petri lėkštelės.

2. Krakmolo agaro terpės sudedamosios dalys (kurių sudėtyje yra krakmolo kaip pagrindinis komponentas) arba jo paruoštas milteliai, reikalingi 100 ml terpės, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuotame vandenyje 250 ml kūginėje kolboje.

3. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir sureguliuojamas iki 7, 2, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudojant 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

4. Kolba visiškai pašildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas.

5. Kolba yra prigludusi prie medvilnės, padengta amatų popieriumi ir sujungiama su sriegiu arba gumine juosta.

6. Dvi Petri lėkštelės ir kūginė kolba, kurioje yra krakmolo agaro terpės, sterilizuojamos 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

7. Po sterilizavimo jie pašalinami iš autoklavo ir tam tikrą laiką leidžiama atvėsti, neleidžiant terpei kietėti. Medžiagos aušinimas neleidžia kondensuotis ir kauptis vandens lašeliuose plokštelėse. Jei laikymo metu terpė jau buvo paruošta ir sukietėjusi, ji turi būti suskystinta atsargiai, kol visiškai ištirps.

8. Norint paruošti krakmolo agaro plokštes, prieš sterilizuotą krakmolo agaro terpę atšaldant ir kietinant, šiltoje išlydytoje aplinkoje jis įpilamas aseptiniu būdu, pageidautina laminarinio srauto kameroje, į du sterilizuotus Petri lėkšteles (maždaug 20 ml). išlydyta terpė visiškai uždengia Petri lėkštelių dugną.

Tada plokštės yra padengtos dangteliais ir leidžiama atvėsti, kad jie būtų tvirti. Vandens garai, kurie gali kondensuotis ant plokščių ir dangčių vidinio paviršiaus, išgarinami, laikant plokšteles ir dangtelius apverstoje padėtyje inkubatoriuje 37 ° C temperatūroje maždaug 1 valandą.

9. Kiekviena plokštė apatinėje pusėje yra pažymėta keturiais ketvirčiais.

10. Bandomųjų bakterijų „inokuliacija“ atliekama aseptiškai, pageidautina laminarinio srauto kameroje, kiekvieno ketvirčio centre, padarytais bakterijų tašku (arba nedideliu tepalu), naudojant liepsnos sterilizuotą kilpą. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

11. Inokuliuojamos plokštelės inkubuojamos inkubatoriuje, kol bakterijos kolonijos yra matomos, apverstos, viršutinės dalies, 37 ° C temperatūroje 24–48 valandas.

12. Plokštelės užtvindomos Lugol jodo tirpalu.