Fenilalaninas deaminizuoja bakterijų tyrimą, kad sužinotų jų gebėjimą pašalinti amino rūgštį (su paveikslu)

Perskaitykite šį straipsnį, kad sužinotumėte apie fenilalaniną, deaminizuojantį bakterijų tyrimą, kad sužinotumėte jų gebėjimą nuvalyti amino rūgštį!

Principas:

Kai kurios bakterijos gali dezaminuoti aminorūgšties fenilalaniną, nes jos gali gaminti fermentą „fenilalanino deaminazė“.

Šis fermentas pašalina fenilalaniną, pašalindamas jo amino grupę, tokiu būdu gamindamas fenilpirovinę rūgštį (keto rūgštį) ir amoniaką (NH3). Fenilpirų rūgštis sudaro žalios spalvos su geležies chlorido tirpalu.

Atliekant fenilalanino deaminazės tyrimą, bandomosios bakterijos auginamos ant agaro sluoksnių, kurių sudėtyje yra fenilalanino. Jei bakterijos geba dezaminuoti fenilalaniną, griovelių geležies chlorido tirpalo lašinant ant griovelių spalva pasikeičia nuo geltonos iki žalios spalvos.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, fenilalanino agaras, geležies chlorido tirpalas (10%), izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Fenilalanino agaro terpės sudedamosios dalys (kurių pagrindiniai komponentai yra fenilalaninas) arba jo paruoštas milteliai, reikalingi 100 ml terpės, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuoto vandens 250 ml kūginėje kolboje, kratant ir sukant ( 7.17 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir sureguliuojamas iki 7, 2, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

3. Kolba sušildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas terpėje.

4. Prieš kietinant, šiltoje lydytoje aplinkoje terpė paskirstoma į 5 mėgintuvėlius (po 20 ml).

5. Mėgintuvėliai yra prijungti prie medvilnės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta.

6. Jie sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

7. Po sterilizavimo jie pašalinami iš autoklavo ir laikomi įstrižai, kad atvėsintų ir sukietintų terpę, kad gautų fenilalanino agaro šlaitus.

8. Bandomosios bakterijos yra aseptiškai inokuliuojamos, pageidautina sluoksniuotoje srauto kameroje, slankant ant plokščių paviršiaus, naudojant liepsnos sterilizuotą kilpą. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

9. Inokuliuojamos plokštelės inkubuojamos inkubatoriuje 37 ° C temperatūroje 24–48 valandas.

10. 4-5 lašai geležies chlorido tirpalo (10%) pridedami prie kiekvieno nuolydžio.