Bakterijų oksidacijos-fermentacijos tyrimas, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą panaudoti gliukozę (su paveikslu)

Oksidacijos-fermentacijos bandymas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą naudoti gliukozę aerobiškai (oksidaciškai) arba anaerobiškai (fermentiškai)!

Principas:

Kai kurios bakterijos gali naudoti gliukozę. Kai kurie iš jų ją naudoja tik esant deguoniui (jautriui ar aerobiškai), o kiti, be aerobinio panaudojimo, taip pat gali jį naudoti be deguonies (fermentatyviai arba anaerobiškai).

Taigi bakterijos, galinčios fermentuoti gliukozę, turi sugebėti jį oksiduoti, bet bakterijos, galinčios oksiduoti gliukozę, negali jo fermentuoti. Jei gliukozė yra naudojama abiem būdais, susidaro rūgštis, kuri sumažina bromo kreolio violetinės spalvos pasikeitimą nuo violetinės iki geltonos spalvos.

Atliekant oksidacijos ir fermentacijos bandymą (O / F bandymas), bandomosios bakterijos auginamos aerobiškai ir anaerobiškai atskirai pusiau kietose agaro lempose, kuriose yra gliukozės ir bromkrezolio violetinės spalvos. Jei bakterijos gali naudoti gliukozę, terpės spalva keičiasi nuo violetinės iki geltonos spalvos. Jei jis naudoja gliukozę aerobiškai, jis yra oksidacinis ir, jei jis naudoja gliukozę anaerobiškai, jis yra fermentacinis.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indelis, inkubatorius, Hugh-Leif-son gliukozės sultinys, skystas parafinas, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Hugh-Leifson gliukozės sultinio terpės (HLGB) sudedamosios dalys (kurių pagrindiniai komponentai yra gliukozė ir bromkrezolis purpurinė) arba jo paruoštas milteliai, reikalingi 100 ml sultinio, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuoto vandens. 250 ml kūginė kolba kratant ir sukant (7.9 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 7, 4, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

3. Nustatę pH, pridedamas agaras. Mažiau agaro čia naudojamas pusiau kietai terpei gauti, kad būtų lengviau užsikimšti.

4. Kolba visiškai pašildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas.

5. Prieš kietinant, šiltoje lydytoje terpėje esanti terpė pasiskirsto į du mėgintuvėlių rinkinius (maždaug 5 ml); kiekvienas rinkinys turi penkis mėgintuvėlius.

6. Mėgintuvėliai yra prijungti prie medvilnės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta.

7. Sultinio mėgintuvėliai sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

8. Sultinio mėgintuvėliams leidžiama atvėsti iki kambario temperatūros.

9. Skystas parafinas sterilizuojamas kaitinant 180 ° C temperatūroje 3 valandas karšto oro orkaitėje.

10. Bandomosios bakterijos yra inokuliuojamos aseptiškai, pageidautina sluoksniuotoje srauto kameroje, į visus sterilizuotus pusiau kietus sultinio mėgintuvėlius, sukdami juos naudojant sterilizuotą liepsną. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

11. Sterilizuotas skystas parafinas švelniai pilamas aseptiškai į vieną inokuliuojamų mėgintuvėlių rinkinį (apie 1 cm aukščio ant terpės), kad gautų anaerobinę būklę.

12. Visi inokuliuoti sultinio mėgintuvėliai inkubuojami inkubatoriuje 24 valandas 37 ° C temperatūroje.