Vandenilio tiekimo bandymas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą gaminti vandenilį (su paveikslu)

Perskaitykite šį straipsnį, kad sužinotumėte apie vandenyje pateiktą bakterijų testą, kad sužinotumėte jų gebėjimą gaminti vandenilį!

Principas:

Kai kurios bakterijos gali sumažinti sieros kiekį vandenilio sulfidu. Tai bespalvė dujos, kuri reaguoja su geležimi (geležies druskomis), kad gautų juodųjų geležies sulfido nuosėdų.

Jis taip pat reaguoja su švino acetatu, kad gautų juodųjų švino sulfido nuosėdų. Vandenilio sulfido bandymas (H, S bandymas) gali būti atliekamas dviem būdais, remiantis sieros šaltiniu.

Jie yra tokie:

i) H2S bandymas naudojant neorganinį sieros šaltinį

(ii) H ₂ S bandymas naudojant organinį sieros šaltinį

i) H ₂ S bandymas naudojant neorganinį sieros šaltinį:

Šiame bandyme bandomosios bakterijos auginamos trimis cukraus geležies agarais (TSI agaro šlaituose), kuriose yra gliukozės, sacharozės, laktozės, fenolio raudonos, natrio tiosulfato ir geležies sulfato. Jei bakterijos naudoja neorganinę sierą (natrio tiosulfatą), naudojamą terpėje, susidaro H 2S, kuris sujungia su geležies sulfatu terpėje, kad susidarytų juodieji geležies sulfido nuosėdos, dėl kurių pasikeičia užpakalinės spalvos juoda spalva. .

Naudojant neorganinę sierą, jei bakterijos gali panaudoti bet kurį iš trijų cukrų (gliukozės, sacharozės ar laktozės), susidaro rūgštis, kuri sumažina terpės pH. Kaip rezultatas, nuolydžio spalva keičiasi nuo raudonos iki geltonos spalvos.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo adata, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, trijų cukraus geležies agaro (TSI agaro) izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. TSI agaro terpės sudedamosios dalys (kurių pagrindiniai komponentai yra 3 cukrūs ir geležis) arba 100 ml terpės, reikalingos paruoštiems milteliams, sveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuoto vandens 250 ml kūginėje kolboje. purtant ir sukant (7.13 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 7, 4, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

3. Kolba sušildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas terpėje.

4. Prieš kietinant, šiltoje lydytoje aplinkoje terpė paskirstoma į 5 mėgintuvėlius (po 20 ml).

5. Mėgintuvėliai yra prijungti prie medvilnės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta.

6. Jie sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

7. Po sterilizavimo jie pašalinami iš autoklavo ir laikomi įstrižai, kad atvėsintų ir sukietintų terpę, kad gautų TSI agaro nuolydį.

8. Bandomosios bakterijos yra inokuliuojamos aseptiškai, pageidautina sluoksniuotoje srauto kameroje, į griovelius, susiurbiant į užpakalį ir nukreipiant juos į slankų paviršių, naudojant liepsnos sterilizuotą adatą. Po kiekvienos inokuliacijos adata sterilizuojama.

9. Inokuliuoti inkubatoriai inkubuojami 24 valandas 37 ° C temperatūroje.

Pastabos:

1. Užpakalis keičiasi į juodą spalvą: H ₂ S teigiamas.

2. Užpakalinės spalvos spalva nesikeičia į juodą: H ₂ S neigiamas.

(ii) H ₂ S bandymas naudojant organinį sieros šaltinį

Šiame tyrime bandomosios bakterijos auginamos cisteino sultinyje, kuriame yra organinio sieros šaltinio cisteino. Jei bakterijos naudoja organinę sierą (cisteiną), naudojamą terpėje, naudojant fermentą „cisteino desulfurazė“, susidaro H 2S. Ši H ₂ S sujungia su švino acetatu, įmirkytu popieriuje, kad susidarytų juodieji švino sulfido nuosėdos, dėl kurių popieriaus juostelės spalva pasikeičia į juodą.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, cisteino sultinys, Whatman filtravimo popieriaus juostelės, švino acetato tirpalas (prisotintas), izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Cisteino sultinio terpės sudedamosios dalys (kurių sudėtyje yra cisteino) arba jo paruoštas milteliai, reikalingi 100 ml sultinio, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuotame vandenyje 250 ml kūginėje kolboje purtant ir sukant ( 7.14 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 7, 5, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis. Kolba prireikus kaitinama, kad visiškai ištirptų ingredientai.

3. Sultinys yra padalintas į penkis mėgintuvėlius (kiekvienas apie 10 ml), užsukti į medvilnę, padengtas amatų popieriumi ir sujungtas su sriegiu arba gumine juosta.

4. Sultinio mėgintuvėliai sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

5. Sultinio mėgintuvėliams leidžiama atvėsti iki kambario temperatūros.

6. Bandomosios bakterijos aseptiškai inokuliuojamos, geriau laminarinės srauto kameros, į sultinį, naudojant inokuliacinę kilpą, sterilizuotą bunseno liepsna. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

7. Nedidelis popieriaus pluoštas, prisotintas švino acetato tirpalu (prisotintas), yra pritvirtintas prie kiekvieno mėgintuvėlio burnos taip, kad ilgą jo dalį išliktų mėgintuvėlyje, o nedidelė dalis lieka išorėje.

8. Inokuliuoti sultinio mėgintuvėliai inkubuojami inkubatoriuje 48 valandas 37 ° C temperatūroje.