Eksperimentas: bakterijų judrumo testas: pakabinant preparatą (su paveikslu)

Tikslas atlikti bakterijų judrumo testą pakabinant lašų paruošimą, kad išsiaiškintumėte, ar jis yra judrus, ar ne judrus.

Tikslas:

Motyvacija reiškia judėjimo gebėjimą savo jėga. Remiantis judrumu, bakterijos gali būti suskirstytos į dvi grupes.

(1) Motilinės bakterijos:

Bakterijos, kurioms būdingas judėjimo gebėjimas aplinkinėje terpėje, kurioje jis lieka suspenduotas, yra judrios bakterijos.

(2) Ne judriosios bakterijos:

Bakterijos, neturinčios vidinio gebėjimo judėti aplinkinėje terpėje, kurioje ji lieka suspenduota, yra nejudrios bakterijos. Ne varomosios bakterijos gali rodyti akivaizdų judrumą, atsirandantį dėl jų rudos judėjimo, kurį sukelia bakterijų ląstelių bombardavimas aplinkinėje terpėje.

Drėgnoje laikiklyje, nors galima stebėti bakterijų formą ir dydį, judrumas gali būti trukdomas, nes suspensija yra paspaudžiama tarp stiklelio ir dangtelio. Štai kodėl; atliekamas kabančių lašų paruošimo ar judrumo tyrimas, siekiant aiškiai stebėti bakterijų judrumą, be jų formos ir dydžio. Tai naudinga nustatant bakterijas.

Principas:

Labai mažas bakterijų suspensijos lašas pakabinamas nuo dangtelio vidurio į ertmės stiklelio ertmę. Kabantis lašas stebimas mikroskopu, naudojant naftos panardinimo tikslą. Jei bakterijos yra judrios, jos ląstelės gali būti laikomos nepastoviai aplinkinėje terpėje.

Priešingai, jei ji nėra judanti, jos ląstelės išlieka statinės terpėje be jokių judesių arba gali rodyti rudos spalvos judėjimą, kurį sukelia vandens molekulių bombardavimas terpėje, bakterijų ląstelėse.

Reikalingos medžiagos:

Ertmės skaidrė, dangčio slydimas, vazelinas arba vazelinas, panardinamoji alyva, 24 val. Sultinio bakterijų kultūra, kilpa ir mikroskopas (junginys, tamsusis laukas arba fazės kontrastas).

Procedūra:

1. Įdubęs stiklas tinkamai išvalomas po vandentiekio vandeniu, kad vanduo neišliktų ant jo paviršiaus. Įdubęs stiklas yra stiklinis stiklas su maža apvalia depresija centre, į kurį gali pakabinti nedidelis bakterijų suspensijos lašas (5.3 pav.).

2. Stiklą išdžiovinkite nuvalydami bibuliuojančiu popieriumi, o po to jį perkelkite į liepsną arba laikydami saulėje.

3. Aplink ertmę dedamas vazelino žiedas (arba vazelinas).

4. Cilindras sterilizuojamas liepsna ir atvėsinamas. Nuo 24 valandų senos sultinio kultūros aseptiškai paimama bakterijų suspensija. Nedidelis suspensijos lašas dedamas ant dangtelio vidurio. Sultinio kultūra neturėtų būti senesnė nei 24 valandos, nes bakterijos gali prarasti savo judrumą, kai jos sensta.

5. ertmės skaidrė yra apversta ir uždėta ant dangčio slydimo taip, kad ertmė apimtų lašą.

6. Šliaužiklį ir dangčio slydimą švelniai prispauskite taip, kad ertmė būtų užsandarinta. Reikia pasirūpinti, kad nė viena ertmės dalis nepalietų kritimo.

7. Slankiklis greitai pasukamas taip, kad lašas pakibtų į ertmę nepaliesti jo.

8. Slankiklis yra nukirptas į mikroskopo etapą.

9. Pilies kraštas sutelktas pagal mažos galios tikslą.

Priežastys, dėl kurių sutelktas kritimo kraštas, yra šios:

a) Geresnis kontrastas atsiranda dėl to, kad lašinio ir viršelio slankioji lūžio rodiklis skiriasi.

(b) Kai lašas pakimba, jis nukreipiamas į kraštą, kuriam krašte yra mažiau bakterijų, kurios turi būti aiškiai matomos dėl judrumo.

c) Paprastai aerobinės bakterijos patenka į kraštą, kad būtų daugiau deguonies kvėpavimui, dėl kurio jos gali būti stebimos krašte.

10. Uždengimo alyvos lašas ant viršelio ant viršutinio virš kabančio lašelio, o pakabinamo lašo kraštas stebimas mikroskopo alyvos panardinimo tikslu. Geriausia, kad aiškiam stebėjimui turėtų būti naudojamas fazės kontrastas arba tamsiojo lauko mikroskopas.

Pastabos (pagal uždavinį, skirtą alyvoms):

1. Motyvacija:

Motilis ar ne judėjimas

2. Bakterijų forma:

Sferinis (coccus)

Strypo formos (baciliai)

Komatas panašus (vibrio)

Spiraliniai (spirocetai)

3. Bakterijų išdėstymas:

Poros (diplobacillus / diplococcus)

Keturi (tetradai)

Grandinėse (streptokokai / streptobacilai)

Vynuogių klasteriai (stafilokokai)

Kuboidinis (sarkina arba oktetas).

4. Bakterijų dydis:

Atlikus akių įvertinimą, užfiksuokite lauką pagal naftos panardinimo tikslą.

(3) Dažymas:

Dažymo tikslas:

Bakterijų ląstelių lūžio rodiklis yra labai panašus į vandens lūžio rodiklį, kuriame jie stebimi, o taip pat į stiklinę, prie kurios jie stebimi mikroskopu. Todėl labai sunku juos aiškiai stebėti.

Siekiant įveikti šį sunkumą, ląstelės yra dažomos dėmėmis, kurios perduoda giliai spalvą ląstelėms ir šviesią spalvą aplinkinei terpei, kurioje jos yra suspenduotos. Gilios spalvos ląstelės turi aiškų kontrastą nuo šviesios spalvos fono ir gali būti aiškiai matomos.

Tokiu būdu dažymas yra metodas, suteikiantis spalvą kitiems bespalviams skaidriems mikroorganizmams, naudojant įvairius biologinius dažus, vadinamus „dėmėmis“ jų mikroskopiniam stebėjimui.

Dėmių chemija:

Dažikliai yra trijų tipų:

1. Dažai:

Jie naudojami bendrosios paskirties dažymui, pvz., Tekstilės medžiagų dažymui ir sienų dažymui.

2. Dėmės:

Jie naudojami biologiniams ar mikrobiologiniams mėginiams dažyti. Tai yra tikslesni ir griežtesni.

3. Rodikliai:

Tai yra cheminės medžiagos, kurios keičia spalvą ir keičia vandenilio jonų koncentraciją (pH).

Nors „dažymas“ yra tinkamas terminas, terminas „dažai“ plačiai vartojamas mikrobiologijoje, norint suprasti dažiklius. Anksčiau natūralūs dažai buvo paruošti iš įvairių augalų. Jie buvo plačiai pakeisti sintetiniais dažais.

Kadangi pirmasis sintetinis dažiklis buvo pagamintas iš anilino, visi sintetiniai dažai vadinami „anilino dažais“. Tačiau dauguma šių dažiklių dabar gaminami iš akmens anglių dervos, kuriai jie dabar vadinami „akmens dervų dažais“. Akmens anglių dervos dažai yra benzeno dariniai. Dažų molekulę sudaro trys komponentai (5.4 pav.), Kaip nurodyta toliau.

a) Benzeno žiedas

b) chromoforo grupė

c) auksochromo grupė

Benzenas yra organinis bespalvis tirpiklis, o chromoforas yra dažiklio komponentas. Benzenas jungiasi su chromoforu, kad susidarytų chromogenas (5.5 pav.). Kadangi chromogenas neturi atskyrimo savybių, jis negali sujungti su ląstelėmis ir lengvai nuplauti.

Kai chromogenas jungiasi su auksochromu, susidaro dažai arba dėmės. Auksochromas suteikia dažikliui elektrolitinę disociacijos savybę (druskos formavimo savybę). Taigi chemiškai dažai yra apibrėžiami kaip organinis junginys, turintis benzeno žiedą, chromoforo grupę ir auksochromo grupę.

Dažymo rūšys:

Bakterijų dažymas yra įvairių tipų, kaip aprašyta toliau (5.6 pav.).

I. Paprastas dažymas:

Čia naudojama tik viena dėmė. Šis dažymas naudojamas stebėti bakterijų formą (kokius, bacilius, vibrio, spirilius) ir išdėstymą (vieną, porą, tetradą, grandinę, klasterį).

Jis yra dviejų tipų:

A. Pagrindiniai dažymai:

Pagrindiniame dažyme bakterijų ląstelių dėmėms naudojama pagrindinė dėmė, pvz., Metileno mėlyna, kristalinė violetinė arba karbolinė fuksinas. Dėmės glaudžiai susiejasi su bakterijų ląstelėmis ir suteikia giliai dėmių spalvą ląstelėms, o aplinkinė terpė - šviesios spalvos.

B. Rūgštinis dažymas:

Į rūgštinį dažymą, rūgšties dėmės, pvz., Eozinas arba nigrosinas, yra naudojamos bakterijų ląstelių dėmimui neigiamai. Dėmės daro aplinkinių spalvų, o bakterijų ląstelė lieka bespalvė.

II. Diferencinis dažymas:

Čia naudojami daugiau nei vienas dėmes. Jis atliekamas šiais tikslais.

A. Atskyrimas į grupes:

Šie diferenciniai dažymo metodai atliekami siekiant diferencijuoti bakterijas į skirtingas grupes pagal jų dažymo charakteristikas.

Šie metodai yra šie:

(a) Grama dažymas:

Šis dažymo metodas atliekamas norint atskirti gramteigiamas ir gramneigiamas bakterijas.

(b) Rūgštinis dažymas:

Jis atliekamas, siekiant atskirti rūgšties ir ne rūgščių greitai bakterijas.

B. Specifinių bakterijų struktūrų vizualizavimas:

Šie diferenciniai dažymo metodai atliekami tam, kad vizualizuotų specifinius bakterijų ląstelių struktūrinius komponentus.

Šie metodai yra šie: