Koagulazės tyrimas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą krešėti kraują (su paveikslu)

Koagulazės tyrimas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą krešėti kraują (su paveikslu)!

Principas:

Patogeniniai bakterijų „Staphylococcus“ padermės yra fermento koagulazė, kuri veikia, šeimininko audiniuose, kad fibrinogeną paverstų fibrinu.

Suformuota fibrino tinklelė supa bakterijų ląsteles arba užkrėstus audinius, apsaugodama bakterijas nuo nespecifinių šeimininkų atsparumo mechanizmų, tokių kaip fagocitozė ir normalus serumo anti-stafilokokinis aktyvumas.

Šis fermentas taip pat padeda kraujui krešėti šeimininke, nes tai yra trombino tipo medžiagos, kuri krešina arba krešuliuoja kraują, pirmtakas. Koagulazės tyrimas atliekamas siekiant atskirti teigiamą koagulazės (patogeninį arba virulentinį) ir koagulazės neigiamą (ne patogeninį arba avirulentinį) Staphylococcus.

Koagulazės bandyme Staphylococcus tiriamųjų rūšių suspensija sumaišoma su kraujo plazma, o inokuliuota plazma periodiškai tiriama fibrino susidarymui ar krešėjimui.

Kraujo susidarymas per keturias valandas interpretuojamas kaip teigiamas rezultatas ir rodo virulentinį (patogenišką) Staphylococcus padermę. Koaguliacijos nebuvimas po 24 valandų inkubacijos yra neigiamas rezultatas, rodantis virulentinį (nepatogeninį) štamą.

Reikalingos medžiagos:

Laboratorinis gyvūnas (triušis arba jūrų kiaulytė), švirkštas, antikoaguliantas (natrio citratas arba heparinas), kraujo surinkimo mėgintuvėliai, centrifuga, mėgintuvėliai, slydimo, inokuliavimo kilpa, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, purkštukai, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros iš Staphylococcus genties.

Procedūra:

1. Švirkštas ir kraujo surinkimo mėgintuvėliai plaunami natrio citrato arba heparino tirpalu, kad būtų išvengta kraujo krešėjimo iš karto po surinkimo (7.24 pav.).

2. Naudojant švirkštą, kraujas surenkamas iš laboratorinių gyvūnų, tokių kaip triušis arba jūrų kiaulytė, ir dedamas į surinkimo mėgintuvėlius.

3. Kraujas centrifuguoja centrifugoje esant 3000 aps./min. 15 minučių.

4. Supernatantas (plazma) surenkamas į kitą citratinį mėgintuvėlį ir liekana (kraujo ląstelės) išmesta.

(a) Skaidymo metodas:

1. Dvi lašai tiriamųjų bakterijų, priklausančių Staphylococcus genties, suspensijos dedamos ant dviejų vienodai padalintų stiklelių pusių, naudojant inokuliavimo kilpą. Vienas lašas naudojamas kaip „kontrolė“, kad pamatytumėte, ar pačios bakterijos yra susmulkintos, o kitas lašas naudojamas kaip „bandymas“.

2. Į „bandomąjį lašą“ pridedama surinktos plazmos lašas, sumaišoma ir inkubuojama kambario temperatūroje.

3. lašai stebimi kas valandą iki 4 valandų.

b) Vamzdžių metodas:

1. Imami du maži mėgintuvėliai. Vienas bandymo vamzdelis pažymėtas „bandymu“ ir kitas „valdymu“. Kiekviename mėgintuvėlyje paimama 0, 5 ml bakterijų suspensijos.

2. Į bandymo mėgintuvėlį įpilama 1 ml plazmos, sumaišoma ir inkubuojama

3. Vamzdžiai stebimi kas valandą iki 4 valandų.