„Voges-Proskauer“ eksperimentas su bakterijomis ir jų gebėjimas panaudoti gliukozę (su paveikslu)

Perskaitykite šį straipsnį, kad sužinotumėte apie Voges-Proskauer testą (VP testas) apie bakterijas, kad sužinotumėte jų gebėjimą panaudoti gliukozę, gaminant acetilmetilkarbinolį!

Principas:

Kai kurios bakterijos gali naudoti gliukozę ir paversti jį acetilmetilkarbinoliu (acetoinu), kuris yra neutralus galutinis produktas.

Šios bakterijos iš pradžių metabolizuoja gliukozę į pirovinę rūgštį, kuri toliau metabolizuojama per metabolinį tarpinį acto rūgštį į acetilmetilkarbinolį (acetoiną) ir C02 per „butilenglikolio kelią“.

Acetilmetilkarbinolis oksiduojamas į diacetilą, esant a-naftalui, esant šarminėms sąlygoms (40% KOH). Diacetilas reaguoja su kreatinino guanidino grupe (iš auginimo terpėje naudojamo peptono), kad gautų rožinės spalvos spalvą.

Voges-Proskauer teste (VP testas) bandomosios bakterijos auginamos sultinio terpėje, kurioje yra gliukozės. Jei bakterijos gali naudoti gliukozę, gamindamos acetilmetilkarbinolį (acetoiną) kaip neutralų galutinį produktą, įdėjus a-nafto tirpalą, po to įpilama rožinė rožinė spalva, po to - 40% KOH.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, MR-VP sultinys (arba gliukozės fosfato sultinys), VP I tirpalas (Barritt reagento tirpalas A) ir VP tirpalas II (Barritt reagento tirpalas B), izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. MR-VP sultinio terpės ingredientai (kurių pagrindinė sudėtinė dalis yra gliukozė) arba paruošti milteliai, reikalingi 100 ml sultinio, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuotame vandenyje 250 ml kūginėje kolboje. sukant (7.5 pav.). Čia taip pat galima naudoti metilo raudonam tyrimui naudojamą sultinį. Paprastai tas pats sultinys naudojamas abiem bandymams (MR ir VP) vienu metu.

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 6, 9, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis. Kolba prireikus kaitinama, kad visiškai ištirptų ingredientai.

3. Sultinys yra padalintas į penkis mėgintuvėlius (kiekvienas apie 10 ml), užsukti į medvilnę, padengtas amatų popieriumi ir sujungtas su sriegiu arba gumine juosta.

4. Sultinio mėgintuvėliai sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

5. Sultinio mėgintuvėliams leidžiama atvėsti iki kambario temperatūros.

6. Bandomosios bakterijos aseptiškai inokuliuojamos, geriausia laminarinėje srauto kameroje, į sultinį, naudojant inokuliacinę kilpą, sterilizuotą bunseno liepsna. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

7. Inokuliuoti sultinio mėgintuvėliai inkubuojami inkubatoriuje 48–72 valandas 37 ° C temperatūroje.

8. VP tirpalas I (turintis α-naftoolį) supilamas į sultinio mėgintuvėlius (po 0, 2 ml) ir gerai sumaišomas.

9. VP tirpalas II (kuriame yra KOH) lašinamas į sultinio mėgintuvėlius (po 0, 6 ml), kruopščiai sumaišomas ir paliekamas stovėti 30 minučių iki 2 valandų.