Katalazės tyrimas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą išskirti vandenilio peroksidą (su paveikslu)
Katalazės tyrimas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą išskirti vandenilio peroksidą (su paveikslu)!
Principas:
Kai kurios bakterijos turi galimybę išskirti vandenilio peroksidą (H 2 0 2 ) į vandenį (H 2 O) ir deguonį (0, ↑), nes jie gali gaminti fermentą „katalazę“.
Vandenilio peroksido skaidymą katalaze rodo laisvos deguonies dujos (0, ↑).
Atliekant katalazės testą, bandomosios bakterijos kilpa įdedama į vandenilio peroksido lašą, paimtą ant skaidrės. Jei bakterija yra pajėgi gaminti katalazę, ji pertraukia vandenilio peroksidą (H 2 O 2 ) į vandenį ir deguonį. Deguonies susidarymas sukelia burbuliavimą ar putojimą, kurį galima pastebėti lašas.
Reikalingos medžiagos:
Skaidrės, bibulinis popierius, inokuliacinė kilpa, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, vandenilio peroksidas (3%), izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.
Procedūra:
1. Slankiklis valomas po vandentiekio vandeniu (7.18 pav.).
2. Slankiklis nuvalomas bibuliuojančiu popieriumi ir išdžiovinamas oru.
3. Slidės centre yra paimtas vandenilio peroksido lašas (3%).
4. Bandomųjų bakterijų kilpa imama aseptiškai, pageidautina laminarinėje srauto kameroje, naudojant liepsnos sterilizuotą kilpą ir įdedama į vandenilio peroksido lašą ant skaidrių. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.
Pastabos:
1. Susitraukimas arba putojimas vyksta laše: katalizė teigiama.
2. Nukritimas arba putojimas nevyksta: katalazė neigiama.
Atsargumo priemonės:
Bakterijų kultūrą iš kraujo agaro terpės negalima naudoti katalaziniam tyrimui, nes kraujo sudėtyje yra katalazės ir jis visada duoda teigiamą rezultatą. Katalazės neigiamos bakterijos yra linkusios miršta be cukraus, nes jos gamina H 2 0 2 arba todėl, kad H 2 0 2 kaupiasi terpėje, kai jie yra veikiami oro ir šviesos.
Todėl tokių bakterijų atsargų kultūros turėtų būti laikomos tamsoje, o patekimas į orą yra ribotas. Katalazė randama beveik visose bakterijose, kurios gali augti aerobiškai. Kadangi fermentą gamina tik gyvybingos bakterijos, daugiau nei 24 valandų amžiaus kultūros negali būti naudojamos katalaziniam tyrimui.
