Eksperimentuokite, kad atliktumėte pagrindinį bakterijų dažymą, kad būtų laikomasi jos formos, dydžio ir išdėstymo

Siekiama atlikti paprastą bakterijų pagrindinį dažymą, stebėti jo formą, dydį ir išdėstymą.

Tikslas:

Negalima stebėti natūralios bakterijų formos, dydžio ir išdėstymo pagrindiniu dažymu, nes šios savybės iškraipomos šilumos fiksavimu.

Be to, kai kurias bakterijas (pvz., Spirilius) sunku sutepti.

Taigi neigiamas dažymas atliekamas dėl dviejų priežasčių:

(a) Stebėti natūralią bakterijų formą, dydį ir išdėstymą, nes čia nėra šilumos fiksavimo.

(b) Stebėti tas bakterijas, kurias sunku nudažyti?

Principas:

Bakterijų ląstelės ant paviršiaus turi neigiamą krūvį, dėl kurio jos yra apsuptos katijonais, pvz., Na ⁺ ir K ⁺ (5.9 pav.). Rūgštiniame dažyme naudojama rūgštinė dėmė, kuri jonizuojasi į anijoninį chromogeną (neigiamai įkrautą dažų joną) ir katijoną.

Neigiamo krūvio chromogenai yra atbaidomi nuo paviršiaus neigiamų įkrovimų bakterijų ląstelėse, dėl kurių dažai negali prasiskverbti į ląstelę. Dabar nespalvotos ląstelės lengvai pastebimos spalvotame fone.

Reikalingos medžiagos:

Skaidrės, kilpa, rūgštus dažymas (eozinas / nigrosinas), sultinio / plokštelės / bakterijų kultūra, mikroskopas, panardinimo alyva.

Procedūra:

1. Skaidriukas tinkamai išvalomas po vandentiekio vandeniu, kad vanduo neišliktų ant jo paviršiaus (5.10 pav.).

2. Prilipęs vanduo nuvalomas bibuliuojančiu popieriumi ir skaidrė džiovinama oru.

3. Nedidelis rūgšties dėmės lašas (nigrosinas / eozinas) yra šalia vieno skaidrės galo.

4. Cilindras sterilizuojamas liepsna ir atvėsinamas. Aseptiškai į dėmių lašą perkeliama bakterijų kilpa iš agaro plokštelės arba šlaito arba bakterijų suspensija iš skysto sultinio. Bakterijų suspensija dėmėje yra švelniai maišant bakterijų kilpą dėmių lašelyje taip, kad lašas nesiskirstytų.

5. Kitas švarus stiklas yra laikomas 30 ° kampu į pirmąją skaidrę taip, kad vienas siauras pirmojo krašto kraštas paliečia vėlesnio paviršiaus galą be dėmių kritimo.

6. Šioje įstrižoje padėtyje antroji stiklelė traukiama į priekį link dėmės kritimo, kol jo kraštas tiesiog paliečia lašą, o lašas nukreipiamas išilgai jo krašto.

7. Šioje įstrižoje padėtyje antroji stiklinė stumiama atgal, kad susidarytų plonas bakterijų tepalas.

8. Tepalas išdžiovinamas ore. Šilumos fiksavimas čia nėra atliekamas.

9. Slankiklis yra nukirptas į mikroskopo stadiją, o tepinėlis stebimas esant mažai galiai ir labai sausiems tikslams.

10. Į tepinėlį dedamas panardinamasis alyvos lašas.

11. Tepalas stebimas pagal naftos panardinimo tikslą.