Fluorescentinė in situ hibridizacija (FISH)
Šiame straipsnyje aptarsime Fluorescent in situ hibridizaciją (FISH).
Tai laboratorinė technika, naudojama nustatyti, kiek ląstelėje yra tam tikro DNR segmento kopijų. Jis identifikuoja specifinį chromosomų regioną citologiniuose preparatuose. Laboratorijoje DNR segmentas yra chemiškai modifikuotas arba dažomas fluorescenciniu dažikliu ir, tiriant fluorescenciniu mikroskopu, atrodo labai ryškios spalvos fluorescencinė.
Fluorescencinė in situ hibridizacija labai padidino chromosomų analizės jautrumą, specifiškumą ir skiriamąją gebą.
Šio metodo privalumai yra daug, tačiau kai kurie iš jų paminėti taip:
(1) Šio metodo skiriamoji geba yra daug geresnė nei tradicinių chromosomų juostų ir maždaug 2 mega bazių (Mb) ilgio.
(2) Šio metodo protokolas yra paprastas ir taikomas tiek skirstomosioms ląstelėms, tiek ne dalijamoms ląstelėms. Šis metodas gali nustatyti daugybę mutacijų, įskaitant ištrynimą, dubliavimą, aneuploidiją ir išvestinių chromosomų buvimą. Šis metodas taip pat dažniausiai naudojamas stebint pasikartojančias ar likusias ligas kaulų čiulpų transplantacijos pacientams.
FISH (fluorescencinė in situ hibridizacija) paprastai atliekama su stimuliuojamu periferiniu krauju tiek chromosomų analizei, tiek specifinio perkėlimo ir ištrynimo nustatymui. Pavyzdžiui, jis naudojamas filadelfijos chromosomai (Ph 1 ), atsiradusiai perkeliant tarp 9 ir 22 chromosomų, ir sukelia lėtinę mielogeninę leukemiją (CML).
Jis taip pat naudojamas identifikuojant translokaciją tarp 8 ir 14 chromosomų, sukeliančių Burkitt limfomą ir tarp 18 ir 14 chromosomų, dėl kurių atsiranda B-ląstelių leukemija. Jis taip pat naudojamas Dauno sindromui diagnozuoti.
FISH procedūros metu galima paruošti ląstelių kultūras. Metafazės / prometafazės chromosomos pritvirtinamos ant stiklo. Be to, FISH galima modifikuoti analizuojant tarpfazinius branduolius. Tada chromosomos yra denatūruotos; po to įvedamas žymėtas DNR zondas, o tada zondas hibridizuojasi su chromosoma ant stiklelio. Todėl pateiktas terminas „in situ“.
DNR zondai yra pažymėti fluorochromu, toks zondas suteikia fluorescencinį signalą ir gali būti matomas su fluorescencine mikroskopija. Fluorescencija gali būti išskaičiuota naudojant filtrus, prijungtus prie fluorescencinio mikroskopo.
FISH zondai yra maždaug 40 kilogramų bazės (kb) ilgio ir yra aptikti kaip dvigubas fluorescencinis signalas kiekvienam chromosomų poros nariui. Dvigubas taškas atitinka signalus iš kiekvienos iš dviejų suderintų seserų chromatidų.
Paprastai taikant įprastą FISH modelį bet kuriam tokiam zondui būtų du dvigubų taškų rinkiniai, po vieną rinkinį kiekvienam įprastai suporuotų chromosomų nariui. Šie dvigubi taškai dažnai sujungia vieną signalą. Vienos branduolio monosominės ląstelės rodytų tik vieną dvigubo taško rinkinį per branduolį, o trisominės ląstelės parodytų tris dvigubų taškų rinkinius.
