Trijų cukraus geležies testas bakterijoms, siekiant išsiaiškinti gebėjimą gaminti vandenilio sulfidą (su paveikslu)

Perskaitykite šį straipsnį, kad sužinotumėte apie trigubą cukraus geležies testą bakterijoms, kad sužinotumėte galimybę gaminti vandenilio sulfidą!

Tikslas atlikti trijų cukraus geležies bandymą (TSS bandymas), siekiant nustatyti bakterijų gebėjimą panaudoti bet kurį vieną ar daugiau trijų cukrų, pvz., Gliukozę, sacharozę ir laktozę, taip pat gebėjimą gaminti vandenilio sulfidą (H ₂ S), kuris sumažina geležį.

Principas:

Kai kurios bakterijos turi galimybę panaudoti vieną ar daugiau iš trijų cukrų, pvz., Gliukozės, sacharozės ir laktozės.

Jei naudojamas vienas ar daugiau trijų cukrų (trigubų cukrų), susidaro rūgštis, kuri sumažina fenolio raudonos spalvos pH pasikeitimą nuo raudonos iki geltonos.

Be to, kai kurios bakterijos gali gaminti vandenilio sulfidą (H2S), naudodamos sieros junginius. Taip pagamintas H 2S sujungiamas su geležies junginiu, geležies sulfatu, kad susidarytų juodieji geležies sulfido nuosėdos.

Trijų cukraus geležies bandyme (TSS bandymas) bandomosios bakterijos auginamos ant agaro sluoksnių, kurių sudėtyje yra gliukozės, sacharozės, laktozės, fenolio raudonos, natrio tiosulfato ir geležies sulfato. Nors terpėje yra gliukozės (ty D-gliukozės arba dekstrozės), esant mažai 0, 1% koncentracijai, sacharozės ir laktozės koncentracija yra didelė, 1%.

Jei bakterijos turi galimybę panaudoti vieną ar daugiau iš trijų cukrų, terpės spalva pasikeičia nuo raudonos iki geltonos spalvos. Jei bakterijos sugeba gaminti H2S, terpė įgyja juodą spalvą. Kadangi terpėje naudojami trys cukrūs ir geležies junginys, bandymas vadinamas trigubo cukraus geležies bandymu.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo adata, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, trigubo geležies (TSI) agaras, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. TSI agaro terpės sudedamosios dalys (kurių pagrindiniai komponentai yra 3 cukrūs ir geležis) arba 100 ml terpės, reikalingos paruoštiems milteliams, sveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuoto vandens 250 ml kūginėje kolboje. purtant ir sukant (7.7 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 7, 4, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

3. Kolba sušildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas terpėje.

4. Prieš kietinant, šiltoje lydytoje aplinkoje terpė paskirstoma į 5 mėgintuvėlius (po 20 ml).

5. Mėgintuvėliai yra prijungti prie medvilnės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta.

6. Jie sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

7. Po sterilizavimo jie pašalinami iš autoklavo ir laikomi įstrižai, kad atvėsintų ir sukietintų terpę, kad gautų TSI agaro nuolydį.

8. Bandomosios bakterijos yra inokuliuojamos aseptiškai, pageidautina sluoksniuotoje srauto kameroje, į griovelius, susiurbiant į užpakalį ir nukreipiant juos į slankų paviršių, naudojant liepsnos sterilizuotą adatą. Po kiekvienos inokuliacijos adata sterilizuojama.

9. Inokuliuoti inkubatoriai inkubuojami 24 valandas 37 ° C temperatūroje.

Pastabos:

1. Geltonas užpakalis ir raudonasis griovelis su arba be dujų gamybos (pertraukos agaro užpakalyje):

Susidarė rūgštis ir šarminis šlaitas. Čia tik gliukozė buvo naudojama anaerobiniu būdu (fermentatyviai), todėl švelnus rūgštis (geltona). Kitas cukrus nebuvo panaudotas. Kadangi gliukozės koncentracija yra mažesnė (0, 1%), nedidelis rūgšties kiekis, susidaręs ant šlaito paviršiaus, oksiduojamas greitai, todėl jis yra šarminis (raudonas).

Be to, terpėje esančio peptono oksidacinis dominavimas sukuria NH _Y, kuris tampa šarminiu šarmu (raudonas). Tačiau užpakalyje rūgšties būklė palaikoma dėl sumažėjusio deguonies prieinamumo ir lėtesnio bakterijų augimo. Taigi bakterijos yra teigiamos gliukozės.

2. Geltona užpakalinė ir geltona šlaitas su dujų gamyba arba be jos:

Susidarė rūgštis ir rūgštis. Čia fermentuota laktozė ir (arba) sacharozė. Kadangi jų koncentracija terpėje yra didelė, jie gamina didelį kiekį rūgščių, dėl kurių susidaro rūgštus ir rūgštus užpakalis ir išlaikoma rūgštinė būklė. Taigi bakterijos yra sacharozės / laktozės teigiamos.

3. Raudonasis užpakalis ir raudonasis kampas:

Nė vienas iš trijų cukrų nebuvo fermentuotas. Vietoj to, peptonai buvo katabolizuojami anaerobinėmis ir (arba) aerobinėmis sąlygomis, dėl to susidarė šarminė sąlyga dėl amoniako gamybos.

Jei įvyksta tik peptonų aerobinis skilimas, tik šlaitinis paviršius tampa šarminiu (raudonas). Jei yra aerobinis ir anaerobinis peptono skaidymas, tiek šlaitas, tiek užpakalis tampa šarminiu (raudonas). Taigi bakterijos yra neigiamos.

4. Užpakalio užtemimas:

Be bet kurios iš pirmiau minėtų sąlygų, jei atsiranda užpakalinės sudėties nudegimas, tai rodo, kad bakterijos gali gaminti H2S, naudodamos neorganinę sierą (natrio tiosulfatą), esančią terpėje.

H ₂ S sujungia su geležies sulfatu terpėje, kad susidarytų juodieji geležies sulfido nuosėdos, dėl kurių pasikeičia vidutinio ir juodo spalva. Taigi bakterijos yra teigiamos H2S.

5. Nėra juodesnis užpakalis:

Bakterijos nesugeba gaminti H2S naudojant neorganinę sierą (natrio tiosulfatą), esančią terpėje. Taigi bakterijos yra H ₂ S neigiamos.