Bakterijų auginimo reikalavimai (gausios maistinės medžiagos ir optimalios aplinkos sąlygos)

Pagrindiniai bakterijų auginimo reikalavimai yra: (I) gausios maistinės medžiagos (II) optimalios aplinkos sąlygos

Bakterijos yra visur beveik visur; dirvožemyje, ore, vandenyje ir netgi visų gyvūnų burnoje ir žarnyne. „Bakterijų auginimas“ arba „bakterijų kultūra“ - tai minėtų nematomų bakterijų auginimas maistingai turtingose ​​medžiagose ir tinkamose aplinkos sąlygose, kurios palaiko jų spartų augimą ir dauginimąsi.

Dėl to pasireiškia, kad didelė populiacija matoma plika akimi (kaip kolonijos arba drumstas suspensija). Taigi, yra du pagrindiniai bakterijų auginimo reikalavimai, tokie kaip (I) Gausios maistinės medžiagos ir (II) Optimalios aplinkos sąlygos.

(I) Gausios maistinės medžiagos:

Natūraliai, bakterijos užima aplink juos esančias sudėtingas maistines medžiagas, jas išskiriančius fermentus skaidydamos į paprastesnes formas. Tačiau laboratorijoje spartus augimas yra padidintas juos auginant medžiagose, kurių sudėtyje yra maistinių medžiagų.

Šios medžiagos, turinčios pakankamą maistinių medžiagų kiekį paprastesnėse bakterijų augimo ir dauginimo formose, vadinamos „kultūros terpėmis“. Dabar yra daugybė auginimo terpių, kuriose yra skirtingų ingredientų. Kultūros terpės gaunamos trimis „fizinėmis formomis“.

1. Skystos terpės arba sultinio:

Tai yra skaidrūs skysčiai, kurių sudėtyje yra vandens ir maistinių medžiagų paprastesnėmis bakterijų, kurios buvo sterilizuotos autoklave, augimui. Kai bakterijos yra inokuliuojamos į jas ir inkubuojamos jų augimui tinkančiomis sąlygomis, jos auga gausiai į storas bakterijų ląstelių suspensijas, dėl kurių terpė tampa drumsta.

2. Kietosios medijos:

Tai kietintos medžiagos, kuriose skysti sultiniai buvo papildyti kietėjimo agentu, vadinamu „agaru“, daugiau nei 1%. Agaras yra milteliai (kartais vadinami agarais), išgauti iš jūros dumblių ir yra kompleksinis angliavandenis, daugiausia sudarytas iš galaktozės.

Svarbu pažymėti, kad; agaras yra kietinamasis agentas ir neturi bakterijų maistinės vertės. Jis tarnauja kaip puikus kietinimo agentas, kaip vandeninis tirpalas suskystina esant 100 ° C temperatūrai ir sukietėja 40 ° C temperatūroje. Dauguma žmogaus patogeninių bakterijų auginamos 37 ° C temperatūroje (normalios žmogaus kūno temperatūros).

Agaras neišlydo šioje temperatūroje ir suteikia kietą paviršių. Šiame mitybos požiūriu turtingame kietame paviršiuje kiekviena bakterija auga, daugėja ir sukuria izoliuotą tų bakterijų koloniją. Toks išskyrimas neįmanomas skystose terpėse, kuriose bakterijos auga suspensijoje.

Kietos agaro terpės gali būti paruoštos šiomis formomis:

a) Agaro plokštės:

Agaro milteliai, kurių koncentracija yra didesnė kaip 1%, visiškai ištirpsta skystame sultinyje, pašildant. Tada jis sterilizuojamas autoklave. Jis lieka skystas karštoje būsenoje ir kietėja, kai jis atvės. Šiltame skystyje ji supilama į sterilizuotus Petri lėkšteles (20 ml kiekviename Petri lėkštelėje) ir leidžiama atvėsti, kad jis sudarytų storą sluoksnį Petri lėkštelių apačioje.

Šie Petri lėkštelės, turinčios storą kieto agaro terpės sluoksnį, vadinami „agaro plokštelėmis“ arba tiesiog „plokštelėmis“. Bakterijos yra auginamos kaip izoliuotos kolonijos šiose plokštelėse, kad jas būtų galima surinkti ir izoliuoti.

Šių kolonijų charakteristikos taip pat padeda identifikuoti bakterijas. Petri lėkštelės yra įvairių dydžių, kad atitiktų įvairias eksperimentines sąlygas. Tačiau įprastiniais tikslais naudojami 15 cm skersmens Petri lėkštelės.

b) Agar slants:

Norint paruošti „agaro sluoksnius“ arba tiesiog „slankius“, agaro milteliai, kurių koncentracija viršija 1%, visiškai ištirpsta skystame sultinyje, pašildant. Šiltame skystyje jis yra paskirstomas į mėgintuvėlius (20 ml kiekviename mėgintuvėlyje), prijungtas prie medvilnės ir sterilizuojamas autoklave.

Bandomosiose mėgintuvėliuose sterilizuota terpė leidžiama sukietėti įstrižai, kad susidarytų grioveliai. Skersiniai naudojami grynoms bakterijų, išgautų izoliuojant agaro plokštelėse, kultūroms.

Jie naudojami ir standartinių standartinių pamatinių kultūrų, gautų iš tarptautinių standartinių laboratorijų, priežiūrai. Grynos kultūros ir standartinės kultūros laikomos periodiškai (paprastai nuo 15 dienų iki 1 mėnesio), pervestos į šviežiąsias šlaitas aseptiškai. Slankių augimo savybės taip pat padeda identifikuoti bakterijas.

c) „Agar Deep Tubes“:

Agaro gilūs vamzdžiai ruošiami pagal tą pačią procedūrą, kuri buvo naudojama ruošiant agaro sluoksnius, išskyrus tai, kad čia sterilizavus terpę leidžiama sukietėti vertikalioje padėtyje. Jie pirmiausia naudojami tiriant bakterijų poreikius.

3. Pusiau kietos medžiagos:

Juose yra mažiau nei 1% agaro, todėl jie lieka pusiau kietos. Jie naudojami specifiniams tyrimams.

(II) Optimalios aplinkos sąlygos:

Bakterijų augimą įtakoja kelios aplinkos sąlygos. Norint auginti bakterijas, ji turėtų būti aprūpinta optimaliomis aplinkos sąlygomis. Žemiau pateikiamos svarbiausios aplinkosaugos sąlygos, kurios turi būti teikiamos auginant bakterijas.

1. Medijos pH:

Kiekviena bakterijų rūšis gali augti tam tikruose pH intervaluose. Daugumai bakterijų šis intervalas yra nuo 4 iki 9. Tačiau didžiausias kiekvienos bakterijos rūšies augimas vyksta labai siaurame pH intervale. Šis optimalus pH diapazonas daugumai bakterijų yra 6, 5-7, 5, o daugumai grybų, pelėsiai ir mielės yra 4-6, nes jie mėgsta rūgštinę aplinką.

Norint pasiekti didžiausią augimą, auginimo terpės pH turi būti sureguliuotas pagal šį pH. Cheminės medžiagos, veikiančios kaip buferiai (pvz., KH ₂ P0 ₄, K ₂ HP0 ₄ ), taip pat pridedamos prie terpės, kad būtų užkirstas kelias bet kokiam pH pokyčiui, kuris gali atsirasti dėl to, kad jų augimo metu susidaro rūgštiniai arba baziniai metaboliniai galutiniai produktai. .

2. Inkubacijos temperatūra:

Mezofilai inkubuojami 37 ° C temperatūroje, 55 ° C temperatūroje termofiluose ir 4 ° C temperatūroje.