Nitratų mažinimo bandymas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti gebėjimą sumažinti nitratų kiekį

Perskaitykite šį straipsnį, kad sužinotumėte apie nitratų mažinimo bandymų su bakterijomis rezultatus, kad sužinotumėte jų gebėjimą sumažinti nitratų kiekį!

Principas:

Kai kurios bakterijos gali sumažinti nitratus, nes gali gaminti fermentą „nitrato reduktazė“.

Šis fermentas, esant tinkamam elektronų donorui, sumažina nitratus (N0 - ₃ ) į nitritus (N0 - ₂ ). N0 ₂ buvimą nurodo sulfanilo rūgštis ir a-naftilaminas, kuris keičia spalvą į raudoną.

Atliekant nitratų mažinimo bandymą, bandomosios bakterijos auginamos sultinio terpėje, kurioje yra nitrato (N0 ₃ ^- ). Jei bakterijos gali sumažinti nitratus, sultinys įgauna raudoną spalvą po sulfanilo rūgšties ir a-naftilamino.

Jei raudona spalva neparengiama, tai rodo, kad N03 ^- ne visai sumažina bakterijos, arba bakterijos gamina labai stiprų nitrato reduktazės fermentą, kuris greitai sumažina N03 ^- už N0 ₂ ^- į NH3 ir N2. Tai patvirtinant, pridedama nedidelė dalis cinko dulkių, o tai sumažina NO ₃, jei ji yra terpėje, iki N0 ₂, taip gaunant raudoną spalvą.

Taigi, jei gaunama raudona spalva, tai rodo, kad N0 ₃ ^- terpėje yra nepakitęs ir bakterijos neturi galimybės sumažinti nitratų. Jei raudona spalva neparengta, tai rodo, kad N0 ₃ ^- sumažėjo virš N0 ^- NH ₃ ir N _2, o bakterijos gali sumažinti nitratus.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, nitratų sultinys, cinko dulkės, nitrato reagentas A tirpalas, nitrato reagentas B tirpalas, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Nitratų sultinio terpės sudedamosios dalys (kuriose yra pagrindinis nitratas) arba jo paruoštas milteliai, reikalingi 100 ml sultinio, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuotame vandenyje 250 ml kūginėje kolboje. 7.10 pav.

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir sureguliuojamas iki 7, 2, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis. Kolba prireikus kaitinama, kad visiškai ištirptų ingredientai.

3. Sultinys yra padalintas į penkis mėgintuvėlius (kiekvienas apie 10 ml), užsukti į medvilnę, padengtas amatų popieriumi ir sujungtas su sriegiu arba gumine juosta.

4. Sultinio mėgintuvėliai sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

5. Sultinio mėgintuvėliams leidžiama atvėsti iki kambario temperatūros.

6. Bandomosios bakterijos aseptiškai inokuliuojamos, geriausia laminarinėje srauto kameroje, į sultinį, naudojant inokuliacinę kilpą, sterilizuotą bunseno liepsna. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

7. Inokuliuoti sultinio mėgintuvėliai inkubuojami inkubatoriuje 48 valandas 37 ° C temperatūroje.

8. Į kiekvieną mėgintuvėlį įpilama 0, 5 ml kiekvieno nitrato reagento tirpalo A (turinčio sulfanilo rūgšties) ir nitrato reagento B tirpalo (turinčio a-naftilamino), gerai suplakti ir spalva pasikeičia po 15 minučių.