Metilo raudonasis testas, skirtas išsiaiškinti bakterijų gebėjimą panaudoti gliukozę (su paveikslu)

Perskaitykite šį straipsnį, kad sužinotumėte apie metilo raudoną testą (MR testą), kad sužinotumėte bakterijų gebėjimą panaudoti gliukozę, gaminant stabilų rūgštį kaip galutinį produktą!

Principas:

Kai kurios bakterijos turi galimybę panaudoti gliukozę ir paversti jį stabilia rūgštimi, kaip pieno rūgštimi, acto rūgštimi arba skruzdžių rūgštimi, kaip galutiniu produktu.

Šios bakterijos iš pradžių metabolizuoja gliukozę į piruvinę rūgštį, kuri toliau metabolizuojama per „mišrią rūgšties kelią, kad susidarytų stabili rūgštis.

Gaminamos rūgšties rūšys skirtingoms rūšims skiriasi ir priklauso nuo specifinių fermentų, esančių bakterijose. Taip pagaminta rūgštis sumažina pH iki 4, 5 arba mažesnę, o tai rodo, kad metilo raudono spalva pasikeičia nuo geltonos iki raudonos.

Metilo raudoname bandyme (MR testas) bandomosios bakterijos auginamos sultinio terpėje, kurioje yra gliukozės. Jei bakterijos turi gliukozę naudodamos stabilią rūgštį, metilo raudonos spalvos spalva pasikeičia nuo geltonos iki raudonos, kai įdedama į sultinio kultūrą.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliacinė kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, MR-VP sultinys (metilo raudonasis Voges Proskauer sultinys arba gliukozės fosfato sultinys), metilo raudonasis tirpalas, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. MR-VP sultinio terpės ingredientai (kurių pagrindinė sudėtinė dalis yra gliukozė) arba paruošti milteliai, reikalingi 100 ml sultinio, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuotame vandenyje 250 ml kūginėje kolboje. sukasi. MR-VP sultinys taip pat vadinamas gliukozės fosfato sultiniu (7.4 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 6, 9, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis. Kolba prireikus kaitinama, kad visiškai ištirptų ingredientai.

3. Sultinys yra padalintas į penkis mėgintuvėlius (kiekvienas apie 10 ml), užsukti į medvilnę, padengtas amatų popieriumi ir sujungtas su sriegiu arba gumine juosta.

4. Sultinio mėgintuvėliai sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

5. Sultinio mėgintuvėliams leidžiama atvėsti iki kambario temperatūros.

6. Bandomosios bakterijos aseptiškai inokuliuojamos, geriau laminarinės srauto kameros, į sultinį, naudojant inokuliacinę kilpą, sterilizuotą bunseno liepsna. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

7. Inokuliuoti sultinio mėgintuvėliai inkubuojami inkubatoriuje 24–48 valandas 37 ° C temperatūroje.

8. Į kiekvieną mėgintuvėlį įpilama metilo raudono alkoholio tirpalo (3-4 lašai).

Pastabos:

1. Raudona spalva: teigiama MR (ty bakterijos konvertuoja gliukozę į stabilią rūgštį, kaip rodo metilo raudonos konversijos nuo geltonos iki raudonos spalvos. Tai rodo mišrią rūgštinę fermentaciją).

2. Raudona spalva neparengta: MR neigiamas (ty gliukozė terpėje nebuvo paversta stabilia rūgštimi. Tai rodo butilenglikolio fermentaciją).