Lipidų hidrolizės bandymas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą hidrolizuoti lipidus (su paveikslu)

Perskaitykite šį straipsnį, kad sužinotumėte apie lipidų hidrolizės testą, kad sužinotumėte bakterijų gebėjimą hidrolizuoti lipidus (riebalus)!

Principas:

Kai kurios bakterijos turi galimybę hidrolizuoti lipidus (riebalus) į glicerolį ir riebalų rūgštis, nes jie turi lipolitinį fermentą „lipazę“.

Šios bakterijos vadinamos lipolitinėmis bakterijomis. Nors lipidai sudaro emulsiją, kai jie išduodami agare, duodantys neskaidrumą, jų hidrolizuoti galutiniai produktai, glicerolis ir riebalų rūgštys nesudaro tokios emulsijos su agaru, kuriam jie nesukuria tokio skaidrumo; greičiau - skaidrumą.

Lipidų hidrolizės bandyme bandomosios bakterijos auginamos ant agaro plokštelių, kuriose lipidų substratas yra tributirinas. Tributirinas, išduodamas į agarą, sudaro emulsiją ir sukuria neskaidrią terpę.

Jei bakterijos turi galimybę hidrolizuoti lipidus, jos kolonijos hidutizuoja terpėje esančias tributiriną tose vietose, kuriose yra tirpių glicerolių ir riebalų rūgščių (sviesto rūgštis), o likusios plokštelių dalys turi nehidrolizuotą tributiriną.

Todėl aplink kolonijas susidaro skaidrios skaidrios zonos, nes aplink juos susidariusios hidrolizuotos medžiagos, glicerolis ir riebalų rūgštys nesudaro emulsijos. Kita vertus, likusios plokščių sritys lieka nepermatomos, nes šiuose plotuose nesodrolizuotas tributirinas sudaro emulsiją su agaru.

Reikalingos medžiagos:

Petri lėkštelės, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indelis, inkubatorius, tributirino agaras, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Išvalomi du Petri lėkštelės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta (7.22 pav.). Šis etapas ir Petri lėkštelių sterilizavimas 6 etape yra praleidžiami, jei sterilizuoti orkaitėje sterilizuoti Petri lėkštelės yra naudojami tiesiogiai.

2. Tributirino agaro terpės sudedamosios dalys (išskyrus tributiriną, kuris yra lipidų komponentas) arba jo paruoštas milteliai, reikalingi 100 ml terpės, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuoto vandens 250 ml kūginėje kolboje. sukasi.

3. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir sureguliuojamas iki 7, 2, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudojant 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

4. Kolba visiškai pašildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas.

5. Atvėsinus iki maždaug 90 ° C, tributirinas pridedamas ir emulguojamas Warring maišytuve.

6. Kolba yra prigludusi prie medvilnės, padengta amatų popieriumi ir sujungiama su sriegiu arba gumine juosta.

7. Dvi Petri lėkštelės ir kūginė kolba, kurioje yra tributirino agaro terpė, sterilizuojamos 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

8. Po sterilizavimo jie pašalinami iš autoklavo ir tam tikrą laiką leidžiama atvėsti, neleidžiant terpei kietėti. Medžiagos aušinimas neleidžia kondensuotis ir kauptis vandens lašeliuose plokštelėse. Jei laikymo metu terpė jau buvo paruošta ir sukietėjusi, ji turi būti suskystinta atsargiai, kol visiškai ištirps.

9. Norint paruošti tributirino agaro plokštes, prieš sterilizuotą tributirino agaro terpę atvėsinant ir kietinant, šiltoje išlydytoje aplinkoje jis įpilamas aseptiškai, pageidautina laminarinio srauto kameroje, į du sterilizuotus Petri lėkšteles (maždaug 20 ml), kad išlydyta terpė visiškai uždengia Petri lėkštelių dugną.

Tada plokštės yra padengtos dangteliais ir leidžiama atvėsti, kad jose sukietėtų terpė. Tributirinas, išduodamas agare, sudaro emulsiją, gamindamas nepermatomą terpę. Vandens garai, kurie gali kondensuotis ant plokščių ir dangčių vidinio paviršiaus, išgarinami, laikant plokšteles ir dangtelius apverstoje padėtyje inkubatoriuje 37 ° C temperatūroje maždaug 1 valandą.

10. Kiekviena plokštė apatinėje pusėje yra pažymėta keturiais ketvirčiais.

11. Bandomosios bakterijos „spotai inokuliacija“ atliekama aseptiškai, pageidautina laminarinio srauto kameroje, kiekvieno ketvirčio centre, padarytais bakterijų tašku (arba mažu tepalu), naudojant liepsnos sterilizuotą kilpą. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

12. Inokuliuojamos plokštelės inkubuojamos inkubatoriuje, kol bakterijų kolonijos yra matomos apverstoje padėtyje, viršuje žemyn, 37 ° C temperatūroje.