Nežinomų bakterijų identifikavimo eksperimentas (su paveikslu)

Nežinomų bakterijų identifikavimo eksperimentas!

Principas:

Nežinomų bakterijų identifikavimas yra viena svarbiausių mikrobiologų pareigų. Kraujo, audinių, maisto, vandens ir kosmetikos mėginiai kasdien tiriami laboratorijose visame pasaulyje, kad būtų užteršti mikroorganizmai.

Be to, pramonės organizacijos nuolat tikrina medžiagas, kad išskirtų naujus antibiotikus gaminančius mikrobus ar mikrobus, kurie padidins parduodamų produktų, tokių kaip vitaminai, tirpikliai ir fermentai, derlingumą. Išskyrus šiuos nežinomus mikrobus, juos reikia identifikuoti ir klasifikuoti.

Klasifikavimo mokslas vadinamas taksonomija ir susijęs su gyvų organizmų atskyrimu į tarpusavyje susijusias grupes. Bergey nustatomasis bakteriologijos vadovas, 8-asis leidimas, yra oficialus taksonominis raktas, kuriame yra visų žinomų įslaptintų bakterijų užsakymai, šeimos, gentys ir rūšys (III priedas).

Pagrindinės žinios apie dažymo metodus, izoliavimo metodus, bakterijų mitybą, biocheminę veiklą ir bakterijų augimo charakteristikas tampa lengviau identifikuoti bet kokias nežinomas bakterijas.

Kai kurių bakterijų charakteristikos pateiktos 7.2 lentelėje. Kitos bakterijos gali būti identifikuojamos panašiai, remiantis stebėjimais ir rezultatais, gautais atlikus eksperimentines procedūras.

Reikalingos medžiagos:

Skaidrės, ertmės, petri lėkštelės, kūginės kolbos, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, maistinių medžiagų sultinys, maistinės agaras, gramavimo dažymo reagentai, terpė ir reagentai biocheminiams bandymams, sudėtinis mikroskopas, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Atliekamas nežinomų bakterijų dažymas gramais. Be gramavimo dažymo, taip pat užregistruojama jo morfologija ir išdėstymas. Bakterijų judrumo tyrimas nustatomas pagal pakabinamą lašų paruošimą (7.25 pav.).

2. Naudojant sterilų inokuliavimo metodą, bakterijos inokuliuojamos į dvi maistinių agaro sluoksnių, maistinių medžiagų sultinio mėgintuvėlio ir maistinės medžiagos agaro plokštelę, naudojant suleidimą. Po inkubacijos naudojama nežinomų bakterijų kultūrinių charakteristikų nustatymui viena slankioji kultūra.

Antrasis naudojamas kaip atsargų subkultūra, jei reikia pakartoti bet kurį iš bandymų. Augimo charakteristikos taip pat pastebimos sultinio vamzdžio ir kolonijos savybėse ant plokštės.

3. Bakterijos yra inokuliuojamos į atitinkamą terpę, kad būtų atliekami skirtingi biocheminiai bandymai, stengiantis rūpintis steriliomis technikomis, kad nebūtų užteršta kultūra ir taip gautų netikrų rezultatų.

4. Inokuliuojama terpė inkubuojama reikiamoje temperatūroje reikiamam laiko tarpui.

Pastabos:

1. Gramos dažymo metu, be gramų reakcijos, taip pat registruojama bakterijų morfologija ir išdėstymas.

2. Pažymėtos bakterijų kultūrinės charakteristikos maistinių medžiagų sultinyje, agaro sluoksnyje ir maistinių agaro plokštelėje.

3. Užrašomi biocheminių reakcijų rezultatai.

Rezultatų aiškinimas:

1. Naudojant pirmiau įrašytus duomenis (pvz., Žr. 7.1 lentelę) ir naudojant Bergey's determinacinės bakteriologijos vadovą, bakterijos yra identifikuojamos kaip jos gentis ir rūšys. Reikėtų nepamiršti, kad rezultatai gali skirtis priklausomai nuo kiekvienos panaudotos rūšies padermių ir laiko, per kurį bakterijos buvo laikomos atsargų kultūroje.

Stebimi rezultatai gali būti visiškai identiški numatomiems rezultatams. Todėl pasirinktos bakterijos, geriausiai atitinkančios rezultatus. Kai kurių bakterijų identifikavimo charakteristikos pateiktos 7.2 lentelėje.

2. Alternatyviai, naudojant anksčiau užregistruotus duomenis, užregistruotų rezultatų kodų numeriai pateikiami (žr. 7.3 lentelę) ir lengvai identifikuotos bakterijos, naudojant „Apple II“, „IBM PC“ arba „TRS-80“ kompiuterinę programą.

Programa skirta nežinomų bakterijų identifikavimui remiantis nežinomų bakterijų ir žinomų bakterijų panašumo procentais pagal pirmiau pateiktas pastabas.

Norėdami inicijuoti programą „Apple II“ arba „IBM-PC“:

(a) Diskas yra įdėtas į kairįjį diską.

(b) Įjungtas kompiuteris.

(c) Programos instrukcijoms priskiriami atsakymai, nežinomi bakterijų numeriai ir kodų numeriai, nes klausimai rodomi ekrane.

Pradėti TRS-80 programą:

(a) Kompiuteris įjungtas.

(b) Diskas įdėtas į apatinį diską.

(d) Paklaustas „data (MM / DD / YY)“.

(e) „Orange“ mygtukas dar kartą paspaudžiamas.

(f) Programos instrukcijoms sekant rašomi atsakymai, nežinomi bakterijų numeriai ir kodų numeriai, nes klausimai rodomi ekrane.

E. Automatizuoti nežinomų bakterijų identifikavimo metodai:

Nežinomų bakterijų identifikavimas rankiniu būdu naudojant dažymo reakcijas, judrumo testą, kultūrines charakteristikas ir biocheminius tyrimus yra sudėtingas, ilgas ir daug laiko reikalaujantis procesas. Kad procesas būtų paprastas ir trumpas, buvo sukurti automatiniai metodai.

Šie metodai iš esmės naudoja tuos pačius biocheminius bandymus, kaip ir rankiniuose metoduose, bet čia jie atliekami automatiniu būdu, o interpretacija atliekama naudojant kompiuterinę programą.

Dvi tokios sistemos, naudojamos šiuo metu automatiniam bakterijų identifikavimui, pateikiamos taip:

1. MINI API sistema

2. VITEK 2 sistema

F. Tolesnis patvirtinimas:

(1) Serologiniai tyrimai:

Serologinius tyrimus galima atlikti tolesniam nustatytų bakterijų patvirtinimui. Nustatytų bakterijų (pvz., X) suspensijoje sumaišomas antiserumo (anti-X) lašas prieš tas bakterijas. Jei dėl to susidaro gumulėliai ar nuosėdos (X-anti-X kompleksas), patvirtinimas patvirtinamas.

Skirtingų bakterijų antiserumai yra komerciškai prieinami. Jie gaminami komerciškai skirtingose laboratorijose. Konkrečių bakterijų antiserumas gaminamas suleidus nužudytas arba susilpnintas šių bakterijų ląsteles (pvz., X) į laboratorinį gyvūną.

Kaip gynybinis mechanizmas, priimantis gyvūnas gamina antikūnus (anti-X) prieš tą bakteriją, kuri lieka kraujyje. Iš šio gyvūno ir jo serumo kraujas surenkamas specialiais būdais. Šis serumas, kuriame yra antikūnų prieš tą bakteriją, vadinamas tos bakterijos antiserumu.

(2) PCR bandymas:

Polimerazės grandinės reakcijos (PCR) tyrimas yra greitas molekulinis metodas, skirtas patvirtintoms bakterijoms patvirtinti. Šis metodas dažnai naudojamas greitai ir tiksliai aptikti įvairias bakterijas ir virusus.