Eksperimentas su gyvulių virusų auginimu embrionuotame vištienos kiaušiniame (su paveikslu)

Eksperimentuokite, kad augintumėte gyvūnų virusą embrionuotuose viščiukų kiaušiniuose!

Principas:

Virusai gali augti tik gyvose sistemose. Jie negali augti negyvose terpėse, pavyzdžiui, maistinių agarų ar maistinių medžiagų sultinyje. Todėl jų auginimui reikia šeimininkių ląstelių, jautrių konkrečiam virusui.

Virusas, pvz., Bakteriofagas, kuris užkrečia ir auga bakterijų ląstelėse, auginamas naudojant bakterijų ląstelių kultūrą kaip gyvą sistemą.

Pavyzdžiui, viruso kolifagas (bakteriofagas) yra kultivuojamas naudojant E. coli bakterijų kultūrą. Priešingai, gyvūnų virusams, kurie užkrėsti ir auga gyvūnų kūnui, reikia jautrių gyvų gyvūnų sistemų.

Trys gyvų gyvūnų sistemos, naudojamos gyvūnų virusų auginimui laboratorijose, yra tokios:

1. Atsparūs gyvūnai:

Taikant šį metodą, auginamam virusui leidžiama augti gyvo gyvūno, pvz., Pelės arba jūrų kiaulytės, kūno, kuris yra jautrus šiam virusui, organizme. Šis metodas nebenaudojamas, jį pakeitė šie naujesni, efektyvesni ir ekonomiškesni metodai.

2. Audinių kultūra:

Tai labai sudėtinga technika. Čia gyvūninės ląstelės, kurios, kaip žinoma, yra jautrios auginamam virusui ir kurios taip pat greitai dauginasi, pirmiausia išskiriamos iš tinkamo gyvo audinio. Šios ląstelės dedamos į stiklinį arba plastikinį indą, kuriame yra labai turtinga maistinė terpė. Ląstelės prijungiamos prie indo paviršiaus ir toliau dalijasi tol, kol visas paviršius bus padengtas susiliejančiu vienagūšiu ląstelių. Tai vadinama audinių kultūra.

Tada kultivuojamas virusas inokuliuojamas į jautrią audinių kultūrą. Virusas užkrečia gyvas audinių kultūros ląsteles, pakerta jų medžiagų apykaitos mašinas ir sparčiai atkartojasi, taigi ląstelėse daugėja.

3. Embrionuoti viščiukų kiaušiniai:

Šiuo paprastu ir ekonomišku būdu kultivuojamas virusas švirkščiamas į embrionuotą jauniklį. Virusas auga gyvame viščiukų kiaušinyje ir sukelia liga embrione, pasireiškiantį tam tikrais ligos simptomais (citopatogeniniu poveikiu), būdingais šiam virusui. Šių simptomų buvimas rodo šio viruso augimą kiaušinėje.

Reikalingos medžiagos:

Du embrionuoti viščiukų kiaušiniai, žvakidė, tinktūros jodas, sugerianti medvilnė, 70% alkoholio, mažas gręžtuvas, Niukaslio viruso skiedimas 1: 2, švirkštas, sterilus vazeris, sterilus fiziologinis tirpalas, petri lėkštelės, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius.

Procedūra:

1. Dvi embrionuotos viščiukų kiaušiniai yra apšviesti naudojant žvakių įtaisą, kad būtų galima įrodyti embriono gyvybingumą. Embrionas yra gyvybingas, jei jis rodo judėjimą, reaguojant į šviesą. Taip pat nustatomos ir ant kiaušinio lukšto žvakės metu pažymėtos oro pagalvės ir didelių kraujagyslių padėtys (8.7 pav.).

2. Korpusas dezinfekuojamas oro tinkleliu tinktūros jodu ir leidžiamas išdžiūti. Toje pačioje vietoje nuvaloma su absorbuojančia medvilnė, mirkyta 70% alkoholiu.

3. Mažos gręžtuvo galas sterilizuojamas panardinant į 70% alkoholio ir tuomet liepsnojant.

4. Naudojant šį sėjamą, mažas skylė aseptiškai padengiama ant korpuso virš oro srovės, esančios toli nuo kraujagyslių.

5. 0, 2 ml 1: 2 Niukaslio viruso praskiedimo aseptiškai į sterilizuotą švirkštą įpurškiamas į vieno iš dviejų kiaušinių alantojo ertmę. Tai daroma laikant kiaušinį vertikalioje padėtyje, švirkšto adata per korpuso angą įkišama 45 ° kampu, perkeliant oro srovės membraną ir įsiskverbiant į alantojo ertmę. Šis virusas inokuliuojamas kiaušinis yra „bandomasis kiaušinis“.

6. Po inokuliacijos adata ištraukiama ir skylė ant korpuso užsandarinama steriliu karštu vazeriu.

7. Ta pačia technika 0, 2 ml sterilaus fiziologinio tirpalo inokuliuojama į kitą embrionuotą vištienos kiaušinį, kuris yra „kontrolinis kiaušinis“.

8. Abi kiaušiniai inkubuojami 37 ° C temperatūroje 3–4 dienas inkubatoriuje su tinkama drėgme.

9. Stebėjimai pastebimi kiekvieną dieną.

10. Nustačius mirtį, embrionas išstumiamas iš lukšto ir turinys pilamas į Petri lėkštelę ir vėl stebimas.

11. Visos užterštos medžiagos išmestos į stiklinę su balinimo milteliais.

Pastabos:

1. Kiaušiniai kasdien inkubuojant apšviečiami ir stebimi embriono mirtimi, kaip rodo judėjimo nutraukimas, kuris paprastai įvyksta praėjus 3–4 dienoms po viruso inokuliacijos.

2. Nustačius mirtį, embrionas išstumiamas iš lukšto ir įpilama į Petri lėkštelę. Jis stebimas nekrozinių pažeidimų ir kraujavimo įrodymų.

3. Kontrolinis kiaušinis tiriamas siekiant nustatyti citopatogeninį poveikį.

4. Pastabos užfiksuotos 8.2 lentelėje.