Citrato panaudojimo bandymas, siekiant patikrinti bakterijų gebėjimą panaudoti citratą kaip anglies šaltinį

Siekiama atlikti citrato panaudojimo bandymą, siekiant nustatyti bakterijų gebėjimą panaudoti citratą kaip vienintelį anglies šaltinį.

Principas:

Kai kurios bakterijos gali augti terpėje be organinių C ir N.

Jie gali panaudoti natrio citratą kaip vienintelį C ir amonio dihidrofosfato (NH4H2P04) šaltinį kaip vienintelį N. šaltinį. Jie naudoja NH4H2P04, kad gautų N su NH3 gamyba, o tai padidina \ t pH sukelia bromimolio mėlynos spalvos pasikeitimą iš žalios (pH = 6, 9) į mėlyną (pH virš 7, 6).

Citrato panaudojimo bandyme bandomosios bakterijos auginamos ant agaro sluoksnių, kurių sudėtyje nėra organinio C arba N, bet yra natrio citratas, NH4H2P04 ir bromtimolio mėlyna. Jei bakterijos gali panaudoti citratą kaip vienintelį C šaltinį, tai rodo, kad bakterijos auga ant griovelių. Jame taip pat naudojamas NH ₄ H ₂ P0 ₄ kaip vienintelis N šaltinis, dėl kurio pokrypių spalva pasikeičia nuo žalios iki mėlynos.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo adata, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, Simmons citrato agaras, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Simmons citrato agaro terpės ingredientai (kurių pagrindinės sudedamosios dalys yra natrio citratas, NH4H, P04 ir bromtimolio mėlynas) arba paruošti milteliai, reikalingi 100 ml terpės, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuoto vanduo 250 ml kūginėje kolboje purtant ir sukant (7.6 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 6, 9, naudojant 0, 1 N HC1, jei jis yra didesnis arba naudojant 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

3. Kolba sušildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas terpėje.

4. Prieš kietinant, šiltoje lydytoje aplinkoje terpė paskirstoma į 5 mėgintuvėlius (po 20 ml).

5. Mėgintuvėliai yra prijungti prie medvilnės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta.

6. Jie sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

7. Po sterilizavimo jie pašalinami iš autoklavo ir laikomi įstrižai, kad atvėsintų ir sukietėtų terpė, kad gautų citrato agaro šlaitus.

8. Bandomosios bakterijos yra inokuliuojamos aseptiškai, pageidautina sluoksniuotoje srauto kameroje, į griovelius, susiurbiant į užpakalį ir nukreipiant juos į slankų paviršių, naudojant liepsnos sterilizuotą adatą. Po kiekvienos inokuliacijos adata sterilizuojama.

9. Inokuliuojamos plokštelės inkubuojamos inkubatoriuje 37 ° C temperatūroje 24–48 valandas.