Angliavandenių fermentacijos bandymas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą fermentuoti angliavandenius

Angliavandenių fermentacijos bandymas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą fermentuotis Angliavandeniai!

Principas:

Kai kurios bakterijos gali fermentuoti angliavandenius, ypač cukrus. Tarp jų kiekviena bakterija gali fermentuoti tik kai kuriuos cukrus, nors ji negali fermentuoti kitų.

Taigi, cukrūs, kuriuos bakterija gali fermentuoti, ir cukrūs, kurių jis negali, yra bakterijų savybė.

Angliavandenių fermentacijos bandymas atliekamas siekiant atskirai išbandyti bakterijų gebėjimą fermentuoti cukrus, pvz., Gliukozę, sacharozę, laktozę, maltozę ir ksilozę, taip pat jų alkoholinius darinius, pvz., Aesculiną, saliciną, adonitolį, dulcitolį ir sorbitolį. Jei bakterijos gali fermentuoti cukrų ar cukraus darinį, susidaro rūgštis, kuri sumažina bromo kreolio violetinės spalvos pasikeitimą nuo violetinės iki geltonos spalvos.

Be to, jei tai yra „aerogeninės bakterijos“, susidaro tiek rūgštis, tiek dujos (C0 ₂ ), o jei tai yra ananaerogeninės bakterijos “, tik rūgštis gaminama be dujų. Dujų gamybą rodo jo kaupimasis kaip burbulas invertuotame Durham vamzdyje (miniatiūriniame mėgintuvėlyje).

Angliavandenių fermentacijos bandyme bandomosios bakterijos auginamos sultinio terpėje, kurioje yra vienas iš cukrų ar cukraus darinių ir bromkrezolio violetinė. Į jį įsukamas apverstas „Durham“ vamzdis.

Jei bakterijos „gali fermentuoti cukrų ar cukraus darinį, sultinio spalva keičiasi nuo violetinės iki geltonos. Jei dujų kaupimasis laikomas burbuliuku „Durham“ vamzdyje, tai yra akrogeninės bakterijos, o jei nėra dujų kaupimosi, tai yra anaerogeninės bakterijos.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, „Durham“ vamzdžiai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo kilpa, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, angliavandenių sultinys (sultinys, kuriame yra specifinio cukraus ar cukraus darinių, pvz., Gliukozė, sacharozė, laktozė, maltozė, ksilozė aesculinas, salicinas, adonitolis, dulcitolis, sorbitolis ir kt.), izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Angliavandenių sultinio terpės ingredientai (kurių pagrindiniai komponentai yra reikalingi angliavandeniai ir bromkrezolis) arba jo paruošti milteliai, reikalingi 100 ml sultinio, pasveriami ir ištirpinami 100 ml distiliuoto vandens 250 ml kūginėje kolboje. kratant ir sukant (7.8 pav.).

2. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 6, 8, naudojant 0, 1 N HC1, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis. Kolba prireikus kaitinama, kad visiškai ištirptų ingredientai.

3. Sultinys pasiskirsto į penkis mėgintuvėlius (po maždaug 10 ml).

4. Vienas „Durham“ vamzdelis įdedamas į apvalkalą kiekviename mėgintuvėlyje. „Durham“ vamzdeliuose yra oro ir plūdės. Sterilizavimo metu karštas garas išstumia šį orą, dėl kurio jie panardinami į sultinį. Taigi nereikia pašalinti oro iš Durhamo vamzdžių, užpildant juos sultiniu prieš sterilizavimą, kad jie būtų panardinti į sultinį.

5. Mėgintuvėliai yra prijungti prie medvilnės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta.

6. Sultinio mėgintuvėliai sterilizuojami 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave. Alternatyviai, 90 ml bazinės terpės (terpė be angliavandenių) sterilizuojama autoklave, ir po to po atvėsinimo pridedama 10 ml membraninio filtravimo sterilizuoto angliavandenių tirpalo (10%). Tai ypač svarbu karščiui jautriems angliavandeniams, kurie karščio sterilizavimo metu patiria degradaciją.

7. Sultinio mėgintuvėliams leidžiama atvėsti iki kambario temperatūros.

8. Bandomosios bakterijos aseptiškai inokuliuojamos, geriau laminarinės srauto kameros, į sultinį, naudojant inokuliacinę kilpą, sterilizuotą bunseno liepsna. Po kiekvienos inokuliacijos kilpa sterilizuojama.

9. Inokuliuoti sultinio mėgintuvėliai inkubuojami inkubatoriuje 24 valandas 37 ° C temperatūroje.