Ureazės tyrimas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą hidrolizuoti karbamidas (su paveikslu)

Ureazės tyrimas su bakterijomis, siekiant išsiaiškinti jų gebėjimą hidrolizuoti karbamidas (su paveikslu)!

Principas:

Kai kurios bakterijos turi galimybę hidrolizuoti (suskaidant vandenį) karbamido į NH3 ir CO ₂, nes jie gali sukelti fermentą „ureazė“.

NH3 yra šarminis (bazinis), dėl kurio padidėja fenolio raudonos spalvos pH pasikeitimas nuo geltonos iki rožinės spalvos.

Atliekant ureazės tyrimą, bandomosios bakterijos auginamos ant agaro sluoksnių, turinčių karbamidą ir fenolio raudoną. Jei bakterijos geba hidrolizuoti karbamido, terpės spalva pasikeičia nuo geltonos iki rožinės spalvos. Kai kurios bakterijos gali susidaryti NH3, nes jie suskaido peptonus terpėje. Tokiais atvejais gaunamas klaidingas teigiamas rezultatas.

Reikalingos medžiagos:

Mėgintuvėliai, kūginė kolba, medvilnės kamščiai, inokuliavimo adata, autoklavas, bunseno degiklis, laminarinė srauto kamera, šalinimo indas, inkubatorius, membraninio filtravimo aparatas, karbamido agaras, izoliuotos kolonijos arba grynos bakterijų kultūros.

Procedūra:

1. Penki mėgintuvėliai yra prijungti prie medvilnės, padengti amatų popieriumi ir sujungti su sriegiu arba gumine juosta (7.15 pav.).

2. Šlapimo agaro terpės sudedamosios dalys (kurių pagrindinė sudėtinė dalis yra karbamidas) arba jos paruošti milteliai (išskyrus karbamido), reikalingi 100 ml terpės, pasveriami ir ištirpinami 90 ml distiliuoto vandens 250 ml kūginėje kolboje. purtant ir sukant.

3. Jo pH nustatomas naudojant pH popierių arba pH matuoklį ir nustatomas iki 6, 9, naudojant 0, 1 N HCI, jei jis yra didesnis arba naudoja 0, 1 N NaOH, jei jis yra mažesnis.

4. Kolba visiškai pašildoma, kad agaras būtų visiškai ištirpintas.

5. Kolba yra prigludusi prie medvilnės, padengta amatų popieriumi ir sujungiama su sriegiu arba gumine juosta.

6. Penki mėgintuvėliai ir kūginė kolba su karbamido agaru (išskyrus karbamido) sterilizuojamos 121 ° C temperatūroje (15 psi slėgis) 15 minučių autoklave.

7. Po sterilizavimo jie pašalinami iš autoklavo ir kartais leidžiama atvėsti, neleidžiant terpei kietėti. Vidinės terpės aušinimas neleidžia kondensuotis ir kauptis vandens lašeliuose ant nuolydžių. Jei laikymo metu terpė jau buvo paruošta ir sukietėjusi, ji turi būti suskystinta atsargiai, kol visiškai ištirps.

8. 20% karbamido tirpalas paruošiamas ištirpinant 20 g karbamido 100 ml distiliuoto vandens ir sterilizuojamas membraninio filtravimo aparatu, nes karbamidas negali būti sterilizuojamas šiluma, nes jis suyra kaitinant.

9. 10 ml sterilizuoto karbamido tirpalo aseptiškai gerai sumaišoma su 90 ml sterilizuoto aušinamo suskystintos terpės (suskystintos kaitinant).

10. Prieš sukietėjus, terpė šiltoje išlydytoje aplinkoje aseptiškai pasiskirsto į 5 sterilizuotus medvilninius mėgintuvėlius (maždaug 20 ml).

11. Mėgintuvėliai laikomi įstrižai, kad atvėsintų ir sukietintų terpę, kad gautų karbamido agaro sluoksnius.

12. Bandomosios bakterijos aseptiškai inokuliuojamos, pageidautina sluoksniuotoje srauto kameroje, į griovelius, sudedant į užpakalį ir nukreipiant juos į slankų paviršių, naudojant liepsnos sterilizuotą adatą. Po kiekvienos inokuliacijos adata sterilizuojama.

13. Inokuliuojamos plokštelės inkubuojamos inkubatoriuje 37 ° C temperatūroje 24 valandas.