Žmogaus genomo projekte naudojami metodai

Kai kurie svarbūs žmogaus genomo projekte naudojami metodai yra tokie:

(a) DNR sekos nustatymas yra sekos nustatymo metodai nukleotidų bazių - adenino, guanino, citozino ir timino - eilės nustatymui DNR molekulėje. Yra du bendri metodai, būtent Maxam Gilbert technika, kuri naudoja chemines medžiagas, kad išskirstytų DNR į fragmentus tam tikrose bazėse; arba dažniausiai „Sanger“ technika.

Jis taip pat vadinamas di-dezoksi arba grandinės nutraukimo metodu. Ji naudoja DNR polimerazę, kad sukurtų naujas DNR grandines, dalyvaujant di- deoksinukleotidų grandinės terminatoriams, kad grandinė atsitiktinai sustabdytų augimą. Abiem atvejais DNR fragmentai atskiriami pagal ilgį poliakrilamido gelio elektroforezės būdu. Tai leidžia skaityti seką tiesiai iš gelio.

b) Apribojimų fragmento ilgio polimorfizmų (RFLP) panaudojimas.

(c) Mielių dirbtinės chromosomos (YAC) yra vektorius (nešiklis), sukurtas ir naudojamas laboratorijoje DNR vienetų klonavimui. YAC yra sudarytas iš telomerinių, centromerinių ir replikacijos kilmės sekų, reikalingų replikacijai mielių ląstelėse. Telomeras yra chromosomos pabaiga; centromeras yra chromosomų sritis, į kurią ląstelių dalijimosi metu prijungiami veleno pluoštai; ir replikacijos pradžios sekos yra taškai, kur prasideda DNR replikacija.

(d) Bakterinės dirbtinės chromosomos (BAC) yra didelis DNR segmentas (100 000 - 200 000 bp) iš kitos rūšies, klonuotos į bakterijas. Po to, kai užsienio DNR buvo klonuota į šeimininko bakterijas, galima padaryti daug jo kopijų. Tai didelis klonavimo vektorius, galintis apdoroti didelius klonuotos DNR segmentus, paprastai apie 150 kb. BAC gali būti dauginamos laboratoriniuose Escherichia coli padermėse. Šie vektoriai yra naudingi genominių bibliotekų kūrimui genomo skalės sekos projektams.

e) polimerazės grandinės reakcija (PCR).

f) Elektroforezė.