Gametų konservavimas žuvyse
Šiame straipsnyje aptarsime lytinių ląstelių konservavimą žuvyse.
Cryoprezervacija yra sandėliavimo būdas, kurio praktiškai nėra. Žuvų gametų išsaugojimas buvo išbandytas šiuo metodu. Spermos konservavimas yra gerai nusistovėjusi gyvulininkystės procedūra.
Dabar užšaldyti spermai sėkmingai naudojami galvijų, arklių, kiaulių, avių ir paukščių veisimui. Įdomu pažymėti, kad buvo dedama daug pastangų, kad ši technologija būtų perduota žuvų spermos, kiaušialąsčių ir embrionų išsaugojimui.
Šis metodas padės žuvų augintojams šiais būdais:
(1) Vyrų ir moterų nejautrumo brendimo problema gali būti išspręsta, jei laikomi spermos ar kiaušialąstės.
(2) Galima atlikti atrankinio veisimo programą, kuri pagerins vietinį išteklius ir padės trečiajam pasauliui auginti savo vietines rūšis ir gaminti ypatingus aukštesniųjų kotelių kamienus.
(3) Lytinių ląstelių konservavimo technika atliks svarbų vaidmenį išsaugant vietinį gemalų plitimą, nes daugelis vietinių Indijos žuvų negali konkuruoti su egzotinėmis žuvimis. Šiuo metodu grėsmingų rūšių lytinės ląstelės yra apsaugotos nuo mažėjančio genetinio kintamumo, kurį sukelia aplinkos sutrikimai.
(4) Tai gali padėti kurti vienos lyties kultūrą.
(5) Jei gali būti sėkmingai išsaugotos lytinės ląstelės, mes galime ištisus metus vystyti žuvis pagal mūsų reikalavimą ir galime padėti sukurti genų banką, kad būtų išsaugotas genetinis gyventojų savitumas ir kad jie būtų prieinami pakartotinai, kai pagerėjo bendrosios išgyvenimo sąlygos.
Spermos, kiaušiniai ir embrionai gali būti užšaldyti, tačiau kiaušinių ir embrionų išsaugojimas yra sunkus, nes šiuose ląstelėse nepakankamai absorbuojamas krioprotektantas, nes jų dydis yra didelis, palyginti su spermatozoidais.
Žmogaus spermatozoidų krioprezervacija žuvyse yra sėkminga; rūšys Šios rūšys yra Oncorhynchus, Salmo, Salvilinus fontinalis, Hucho hucho, Thymallus thymallus, Esox lucius ir Cyprinus carpio, Serothodon mossambicus; Labeo rohita, Catla catla ir Cirrhinus mrigala.
Laikantis spermatozoidų turi būti laikomasi šių veiksmų:
(1) Milto (spermos) rinkimas.
(2) Tirpiklio paruošimas.
(3) Cryoprotectant atranka.
(4) Užšaldymas.
(5) Sėkmė tręšiant.
Miltų rinkinys:
Pirmasis žingsnis yra surinkti spermus. Paprastai spermos surenkamos iš sveikų žuvų pašalinimo būdu. Gali būti naudojamas kateteris, kuris yra geresnė alternatyva pašalinimui. Parinkti ir išplauti geriausiais būdingais bruožais, kurie buvo geriausiomis savybėmis, ir genitalijų papilės regionas yra išdžiovintas.
Broderys gali būti anestezuotas arba anestezuotas. Dažniausiai naudojama anestezija yra 0, 3 ml / l fenoksietanolio. Kumaro (1989) teigimu, indo karpių rezultatas geresnis rezultatas - 250 sustojimo (organo) injekcija. Dauguma šioje srityje dirbančių darbuotojų rekomendavo nudeginti žuvis, kad būtų galima išplauti.
Miltas surenkamas į švirkštus arba hemolizės mėgintuvėlius, o vėliau konservuojamas stiklinėmis ampulėmis (užsandarintos arba neuždarytos), plastikinėmis šiaudais ir dažnai plastikiniuose maišeliuose. Reikia pastebėti spermos spalvą, tūrį, tankį, pH ir judrumą.
Mėginys neturi būti šlapimo ir išmatų. Mėginys turi būti tiriamas mikroskopu, kad būtų galima pastebėti spermos sutrikimus. Jei mėginys yra gerai, tuomet įdėkite tolesniam apdorojimui, kitaip gali būti paimtas naujas mėgėjų mėginys.
Spermatozoidų surinkimo ir konservavimo laikotarpiu švirkštas / ampulės / šiaudai gali būti laikomi tvenkinio vandenyje, kad palaikytų pastovią temperatūrą. Legendinis ir Billardas (1980) surinko spermus į hemolizės mėgintuvėlius lydant ledą ir po to laikė ant šaldytuvo paviršiaus 4 ° C temperatūroje.
Krioprezervavimo metu labai svarbu paruošti ir pasirinkti plėvelę, tirpalą, kuriame renkama milt. Plėtiklis užkerta kelią spermos energijos išeikvojimui ir palaiko spermatozoidą quiscent sąlygomis, bet gyvas.
Yra du pagrindiniai užpildai. Jie vadinami Mounibs terpė (M) ir Menezo laikmena (Me). Šiuose dviejose terpėse pridedama galvijų seruninio albumino (BSA) ir tellurito kiaušinio trynio. Indijos žuvims buvo išbandyta keletas pailgintojų, pakeičiant jų sekančias dalis.
Bendrosios sudedamosios dalys yra natrio chloridas, KCI, CaCl2, NaHC03, Na2HP04 ir MgSO4. Be to, maistinės medžiagos ir glicinas taip pat pridedami, kad pagerėtų krioprezervacija. Jei reikia, į papildomą tirpalą taip pat pridedami antibiotikai, tokie kaip gentomicinas arba streptomicinas.
Krioprotektantas:
Cryoprotectant pagrindinė funkcija yra įsiskverbti į ląstelę ir gali padėti spermatozoidams toleruoti užšalimo temperatūrą. Svarbiausias ir plačiai naudojamas yra DSMO (dimetilsulfoksidas) ir glicerolis. Harvey (1983) naudojo metanolį, DSMO ir glicerolį kartu su pieno milteliais arba kiaušinio tryniu.
Krioprotektantas ir ekstensyvus tirpalas fiksuotu santykiu, paprastai viena krioprotekto dalis ir devynios dalelių tirpalo dalys yra žinomos kaip skiediklis. Šiame skiediklyje spermos surenkamos tolesniam apdorojimui užšaldymui.
Skiediklis (krioprotektantas + pailgintojas + spermos) yra paimamas polivinilo šiaudeliuose ir abu šiaudų galai yra užsandarinti, o dabar jie yra paruošti užšaldyti arba atšaldyti. Milt galima atšaldyti, temperatūra palaikoma nuo 0 iki 5 ° C. Naudojant šaldymą, naudojamas CO 2 ir skystas azotas. Atmosferos (0–50 o C) ataušintas saugojimas plačiai tiriamas lašišinių žuvų.
Įšaldymo metu reikia kontroliuoti daugelį problemų, pvz., Šalto šoko, intraceliozinio ledo susidarymo ir osmosinio šoko. Cryoprezervacija paprastai reiškia ląstelių ar audinių laikymą -196 o C temperatūroje, skysto azoto temperatūrą (22.1 pav.).
Ląstelių pažeidimas turėtų būti kontroliuojamas. Dažnai atsiranda trijų tipų ląstelių pažeidimas. Pirmasis yra šalčio šokas, kurį sukelia aušinimas virš užšalimo temperatūros. Tai yra svarbesnė kiaušialąstėms, kurios nėra labai svarbios spermatozoidams.
Tai įvyksta iki 0 ° C. Kai temperatūra pakyla nuo 0 ° C iki -80 ° C, vyksta osmosinis šokas ir intracelulinio ledo susidarymas kiaušialąstėse ir spermoje. Sėkmingai saugant šiuos daiktus kontroliuojami.
Trumpai tariant, šiaudai, kuriuose yra skiediklio, perkeliami į kanistrą. Kanistrai, laikantys šiaudus po to, kai leidžiamas skirtingas pusiausvyros laikotarpis, pirmiausia supilami į skystą azoto garą ir tada į skystą azotą temperatūroje -196 ° C. Legendra ir Billardas (1980) saugojo vaivorykštinių upėtakių spermus sausame lede (kietas CO 2 -79 ° C) arba skystame azotu iki 6 mėnesių.
Daugelyje gėlo vandens rūšių šaldymas buvo atliktas granuliuojant spermos suspaudimą į sausą ledą. Perėjimas nuo 0 ° C iki -70 ° C trunka maždaug 2 minutes, o greitis yra 35 o C / min. Kadangi greitis mažėja virš - 60 ° C. Geriausi rezultatai gaunami skystame azotu.
Atšildymas:
Atšildymas yra atvirkštinis užšalimo atvejis. Atšildymas atliekamas vandens vonioje, esant 10–60 ° C temperatūrai. Visos procedūros sėkmė priklauso nuo spermatozoidų judrumo ir kiaušinių tręšimo gebėjimo.
Stoss ir Holtz (1982) padidino rožinių lašišų spermatozoidų judrumą nuo 30 sekundžių iki 10 minučių, aktyvuodami 120 nm NaHC03 tirpalu, į kurį buvo pridėta 1 BMX (3-izobutil-1-metil ksantio). Kumar (1989) nurodė, kad saugojimo trukmė yra apie 20 dienų L. rohitoje ir H. molitrix, esant kriogeninei būklei.
„Salmo gairdeneri“, „Onchorhynchus kisutch“ ir „O.keta“ kiaušiniai buvo pašalinti, pašalinant juos ir pašalinus juos iš plastikinių maišelių kartu su koelominiu skysčiu ir laikant deguonimi 1 ° C temperatūroje. Tada kiaušiniams leidžiama skleisti vieną ar du kiaušinius.
Tada kiaušiniai sumaišomi su plėstuvo tirpalu ir krioprotektantu beveik taip pat, kaip aprašyta anksčiau spermoms. Pagal Harvey ir Kelley (1984), šaldytų (atšaldytų) kiaušialąsčių laikymas lašišų augaluose buvo vidutiniškai sėkmingas, o laikymo laikas per kelias savaites buvo gautas šaldant oksiduotus kiaušinius koelominiame skystyje.
